편광 신경 조직의 엔지니어링된 실크-콜라겐 기반 3D 모델 개발

Abstract

출처: Chwalek, K. et al., 편광 신경 조직의 엔지니어링 3D 실크 콜라겐 기반 모델.J. Vis. 특급 (2015).

이 비디오는 실크 콜라겐 골격을 사용하여 3D 편광 신경 조직 모델을 만드는 방법을 보여줍니다. 다공성 실크 골격에 신경 세포를 파종하고, 세포 부착을 위해 배양하고, 골격에 콜라겐을 삽입하는 과정을 자세히 설명하고, 3D 편광 신경 조직 모델을 형성하는 데 있어 지지 콜라겐 매트릭스의 중요성을 강조합니다.

Protocol

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 실크 비계 준비

1. Bombyx mori 누에고치에서 실크 용액의 준비
   1. 가위를 사용하여 각 고치를 8등분으로 자릅니다. 조각난 고치 5g에 고치 11개 정도를 사용합니다. (15분)
   2. 0.02 M Na₂CO₃ 용액 2 L를 준비하고 핫 플레이트를 사용하여 끓입니다. (15분)
   3. 조각난 고치 5g의 무게를 달아 Na₂CO₃ 용액에서 30 분 동안 끓입니다. 끓는 실크를 주걱으로 2 분마다 저어줍니다. 탈검밍(de-gumming)이라고 하는 이 단계는 친수성 단백질인 세리신(sericin)에서 실크 피브로인을 정제합니다. (30분)
   4. 손으로 피브로인을 짜내고 증류수로 최소 3회 헹구어 남아 있는 세리신과 화학 물질을 씻어냅니다. (5분)
   5. 젖은 피브로인을 페트리 접시에 놓고 플로 후드 O/N에서 피브로인 추출물을 건조시킵니다.
   6. 다음날, 건조 피브로인 덩어리의 무게를 측정하고 피브로인을 유리 비커에 넣습니다. (15....

Results

그림 1. 실크 스폰지 비계 준비에 사용되는 PTFE 금형. 크기 : 직경 10cm, 높이 2cm.

그림 2. 3D 뇌와 유사한 조직 모델. (A) 다공성 실크 스폰지 스폰지 비계. (B) 콜라겐 매립 전 실크 골격에 파종할 때 1일차에 뉴런의 살아있는/죽은 염색(녹색-살아있는 세포, 적색-죽은 세포). 오른쪽의 패널은 빨간색 프레임으로 캡처된 영역의 배율을 보여줍니다.

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Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
원심분리기 5804 R	에펜도르프
폴리 -D- 라이신	시그마-알드리치	P6407-5MG	최종 농도 10 μg/ml, 물에 용해
Neurobasal 배지	지브코	21103049	사용하기 전에 37°C까지 예열
B27 보충제 50x	지브코	제17504-044
글루타맥스	지브코	제35050-061
페니실린 스트렙토마이신	코 닝	30-002-CI
콜라겐 I, 쥐 꼬리, 100mg	코 닝	354236	최종 농도 : 3 mg / ml
나오	시그마-알드리치	S2770	부식성의
PBS (PBS)	시그마-알드리치	D1283-500ML
나2CO3	시그마-알드리치	제223530
리브르	시그마-알드리치	213225
MWCO 3500 투석 카세트	써모 피셔	66110
가열판	피셔 사이언티픽	아이소템프
체	피셔 사이언티픽	270 호, 35 호, 30 호
폴리에틸렌			집에서 만든 곰팡이 (그림 1) 지름 10cm, 높이 2cm
염화나트륨	시그마-알드리치	71382
바이옵시 펀치 5mm	세계 정밀 기기	501909
바이옵시 펀치 2mm	세계 정밀 기기	501908
트립신	시그마-알드리치	T4049-500ML
DNase	로슈	10104159001	최종 농도 0.3%
대두 단백질	시그마-알드리치	T6522-100MG	최종 농도 : 1 mg / ml