Generating Cortical Interneuron Precursors from Mouse Embryonic Stem Cells(마우스 배아 줄기세포에서 피질 중간뉴런 전구체 생성)

Abstract

출처: Tischfield, D. J., et al Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells into Cortical Interneuron Precursors. J. Vis. 특급 (2017)

이 비디오는 마우스 배아 줄기 세포에서 피질 중간뉴런 전구체를 생성하는 방법을 제시합니다. 이 프로토콜은 줄기세포의 증식 및 배아체(EB)로의 응집을 촉진하는 특정 소분자 억제제를 포함하는 배지에서 줄기세포를 배양하는 것을 수반합니다. 그 후, EB는 효소와 해리되고 접착 단백질로 코팅된 배양 플레이트 웰에 도금되어 피질 중간뉴런 전구체로의 분화를 촉진합니다.

Protocol

1. 미디어 준비

참고: 모든 미디어를 37 °으로 워밍합니다. C 세포 배양에 사용하기 전에.

1. 마우스 배아 섬유아세포(MEF) 배지(500mL 준비용)
   1. Dulbecco의 DMEM(Modified Eagle's Medium) 449mL에 50mL의 소 태아 혈청(FBS)을 추가하고 500mL 0.22μm 공극 필터 장치를 통해 여과합니다.
   2. 여과 후 1mL 항균제(50mg/mL)를 추가합니다. 배지를 4°C에서 최대 1개월 동안 보관하거나 부분 표본을 ≤ -20°C에서 보관합니다.
2. N2 배지(500mL 준비용)
   1. 5mL L-알라닌-L-글루타민(100x) 및 500μL 2-메르캅토에탄올(55mM)을 489.5mL DMEM: 영양 혼합물 F-12(DMEM/F-12)에 추가하고 500mL 0.22μm 공극 필터 장치를 통해 필터링합니다.
   2. 여과 후 1mL 항균제(50mg/mL)와 5mL N2 supplement-B를 추가합니다. 미디어를 4°C의 어두운 곳에서 최대 1개월 동안 보관하십시오.
3. 무혈청 ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
마우스 배아 섬유아세포(CF-1 MEF IRR 7M)	MTI-글로벌스템	GSC-6101G	7M MEF 1바이알은 10cm TC 플레이트 4개에 충분합니다.
FBS(증권 시세	애틀랜타 바이오로직스	S11150H
프리모신	인비보젠	개미-오후-2	항균제라고도 합니다. 기본 매체로 여과하지 말고 여과 후 추가하십시오.
N2 보충 -B	스템셀 기술	7156	기본 미디어로 여과하지 마십시오 -- 여과 후 추가하십시오
글루타맥스(100배)	써모피셔	35050061	L-알라닌-L-글루타민이라고도 합니다.
넉아웃 세럼 교체(KSR)	써모피셔	10828028	무혈청 매체 보충제라고도 합니다.
L-글루타민(100배)	써모피셔	25030081
MEM-NEAA(100배)	써모피셔	11140050
2-메르캅토에탄올	써모피셔	21985023
넉아웃 DMEM	써모피셔	10829018
하이클론 FBS	폭스바겐	82013-578	줄기세포 등급 FBS라고도 합니다.
조직배양처리접시(10cm)	BD 팔콘	353003
비접착성 멸균 페트리 접시(10cm)	폭스바겐	25384-342
백혈병 억제 인자(mLIF)	케미콘	ESG1107	얼리지 말고 4'C에서 보관하십시오.
DMEM/F12	써모피셔	11330032
0.1% 젤라틴 용액	증권 시세	ATCC PCS-999-027
라미닌	시그마	엘2020
폴리-L-라이신	시그마	P6282
트립신-EDTA (0.05%)	써모피셔	25300054
아카쿠타아제	써모피셔	A1110501	세포 해리 시약을 함유한 비트립신(non-trypsin)으로도 알려져 있습니다.
RQ1 RNase-Free DNase	프로메가	M610A의
LDN-193189	줄기 탐지기	04-1974	DMSO에서 재현탁하고 일회용 부분 표본에서 -80'C에 보관
XAV939	줄기 탐지기	04-1946	DMSO에서 재현탁하고 일회용 부분 표본에서 -80'C에 보관
ROCK 억제제(Y-27632)	토크리스	1254	DMSO에서 재현탁하고 일회용 부분 표본에서 -80'C에 보관