유도 신경전구세포(Induced Neural Progenitor Cells)를 성상세포(astrocyte)로 분화(Differentiating Induced Neural Progenitor Cells into Astrocyte)

초록

출처: Meyer, S., et al., Edenhofer, F. Derivation of adult human fibroblasts and their direct conversion into Expandable Neural Progenitor Cells. J. Vis. 특급. (2015년)

이 동영상은 특수 배지를 사용하여 유도 신경전구세포(iNPC)를 뉴런과 성상세포로 분화하는 과정을 보여줍니다.

프로토콜

1. iNPC의 차별화

1. 신경 세포 계통에 대한 분화
   1. 위에서 설명한 바와 같이 라미닌 코팅된 플레이트에서 세포를 배양합니다. 세포가 약 70% 밀집할 때 배지를 neuro-diff-media(DMEM/F-12, 1x N2, 1x B27, 300ng/ml cAMP, 200μM vitamin C, 10ng/ml BDNF, 10ng/ml GDNF)로 변경합니다. 3주 동안 격일로 미디어를 변경합니다. 분화 중에 셀을 분할하지 마십시오.
   2. 3주 후, 세포는 뉴런 마커 TUJ1을 발현해야 합니다. 더 성숙한 뉴런과 뉴런 아형을 얻으려면 최대 3개월까지 분화를 계속하십시오.
2. 신경교계통(glial lineage)으로의 분화
   1. 20ng/ml EGF를 포함한 신경교세포 유도 배지(1:1 DMEM/F-12 : Neurobasal, 1x N2, 1x B27, 10μM β-메르캅토에탄올, 100μM 비필수 아미노산, 1.5mM L-글루타민, 5μg/ml 인슐린, 40ng/ml T3)로 배지를 변경하여 신경교전구세포로의 분화를 유도합니다. 약 2주 동안 미디어의 절반을 제거하고 격일로 새 미디어로 교체합니다. 이 기간 동안 100% 포화도에 도달했을 때 10μM ROCK 억제제 Y27632가 있는 상태에서 세포를 1:3으로 분할해야 합니다.
   2. 2주 후, 세포를 성상세포로 더욱 분화시킵니다: 세포가 거의 합류할 때, 배지를 상업적으로 이용 가능한 성상세포 배지로 변경하고 2일에 한 번씩 배지를 교체합니다. 약 7일 후, 세포는 성상세포 마커(예: GFAP)를 발현하기 시작합니다. 분화 프로토콜 동안 세포가 100% 융합되는 경우, 10μM ROCK 억제제 Y27632가 있는 상태에서 세포를 1:2 비율로 분할합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
성상세포 배지	사이엔셀	1801
나27	라이프테크놀러지	제17504-044
증권 시세	페프로텍	450-02
캠프	시그마	A6885
DMEM을 참조하십시오.	라이프테크놀러지	제41966-029
DMEM F12	라이프테크놀러지	제11320-033
디엠소	로스	4720
디피에스	라이프테크놀러지	제14190-094
증권 시세	생명 기술	PHG0313
증권 시세	바이오크롬 AG	50115
지그엔프	페프로텍	450-10
인슐린	세라랩	보석 - 700 - 112 - P
L-글루타민	라이프테크놀러지	제25030-024
라미닌	시그마	엘2020
엔2	라이프테크놀러지	제17502-048
뉴로기저	라이프테크놀러지	제21103-049
비필수 아미노산	라이프테크놀러지	제11140-050
비타민 C	시그마	A4544 (영어
β-메르캅토에탄올	라이프테크놀러지	21985023

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