빠른 신경관 확장 및 형성 시작기능적 신경 세포 연결

초록

출처: M. H. Magdesian et al., Rewiring Neuronal Circuits: A New Method for Fast Neurite Extension and Functional Neuronal Connection, J. Vis. Exp. (2017)

이 비디오는 미세 유체 장치 및 미세 조작을 사용하여 뉴런의 빠른 시작 및 확장과 대상 뉴런과의 새로운 연결을 생성하는 기술을 보여줍니다. 이것은 외상 후 또는 신경 퇴행성 질환에서 신경 회로를 다시 연결하는 것을 목표로 하는 치료법에 사용될 수 있습니다.

프로토콜

1. 미세유체 소자를 이용한 신경 세포 배양의 표준화: 장치 조립

1. 원하는 실험에 적합한 미세유체 장치를 선택하십시오. 동일한 집단 내의 뉴런을 연결하려면 Neuro Devices(그림 1)를 사용하고, 다른 집단의 뉴런을 연결하려면 Co-Culture Devices(그림 2)를 사용합니다.
2. 원하는 수의 멸균 커버슬립 또는 유리 바닥 접시를 청소하고 준비합니다. 플라스틱 표면에서 최상의 결과를 얻으려면 35mm 접시를 사용하고, 유리에는 25mm 커버슬립 또는 35mm 유리 바닥 접시를 사용하십시오. 이미징 시스템에 따라 유리 두께(예: 0.15mm)를 선택합니다.
3. 접시나 커버슬립을 0.5-1mL의 100μg/mL PDL로 2시간 동안 또는 실온에서 하룻밤 동안 코팅합니다.
   메모: 여기에서 프로토콜을 일시 중지하고 원하는 경우 다음 날 다시 시작할 수 있습니다. 또한 접시는 붕산염 완충액 희석된 PDL, 폴리-L-라이신(PLL), 라미닌 또는 기타 세포 접착 분자로 코팅할 수 있습니다.
4. 접시를 물로 두 번 씻고(소금 결정이 채널을 막을 수 있으므로 인산염 완....

결과

그림 1: 미세유체 소자를 사용한 신경 배양의 표준화7. (a) 장치 조립: 미세유체 장치가 건조한 표면에 적절하게 조립되면 모든 챔버가 보입니다. (b) 세포 도금: 오른쪽 상단의 세포를 플레이트에 넣고 세포가 왼쪽 웰로 이동해야 합니다. (c) 세포 밀도 : 도금 직후 현미경으로 세포의 농도가 적절한지 확인하십시오. (d) 배양 1일 후, 해마 뉴런은 미세채널 가까이에 잘 부착되어 신경돌기를 형성하기 시작합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
신경 장치	아난다 장치		http:// www.anandadevices.com 에서 상업적으로 이용 가능
No. 1 유리 커버슬립 25mm 라운드	워너 인스트루먼트	Tel.: 64-0705
35mm 세포 배양 접시, 비발열성, 멸균	코닝 Inc	430165
95mm x 15mm 페트리 접시, 미끄러질 수 있는 뚜껑, 멸균 폴리스티렌	피셔브랜드	FB0875714G
Neurobasal 배지	생명 기술	제21103-049	세포외 솔루션
B-27 보충제 (50X), 무혈청	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	17504044	세포외 솔루션
페니실린, 스트렙토묘신, 글루타민	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	11995-065	세포외 솔루션
2 - 20 μL 피펫터 에어로졸 저항 팁	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	2149피
Dumont 듀모스 스타 핀셋 11cm	세계적인 정밀 기기	500233
해부 도구	브라운, 애스큘라프
Poly-D-lysine 하이드로 브로마이드	시그마-알드리치	P6407
폴리스티렌 기반 미세 입자, 10μm	시그마-알드리치	72986
수평 피펫 풀러	셔터 기기	브라운 플레이밍 P-97
마이크로 매니퓰레이터, PCS-5000 시리즈 MC7600R	SD 기기	MC7600R
1mL 주사기	BD 루어록	309628
도립 현미경	올림푸스	익스71
객관적 UIS2	올림푸스	루플플른 40X
CCD 카메라	포토메트릭스	캐스케이드 II: 512

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