인간 배아 줄기 세포를 희소돌기아교세포로 분화

초록

출처: Assetta, B., et al. 뉴런-희소돌기아교세포 상호작용 모델링을 위한 만능 줄기세포에서 인간 뉴런 및 희소돌기아교세포의 생성. J. Vis. 특급 (2020).

이 동영상은 인간 배아 줄기 세포에서 희소돌기아교세포 전구세포(OPC)를 생성한 후 OPC가 희소돌기아교세포로 성숙하는 과정을 보여줍니다. 이러한 희소돌기아교세포(oligodendrocyte)를 생성하는 과정은 알츠하이머병을 포함한 신경퇴행성 질환의 연구와 치료를 개선할 수 있는 수많은 길을 열어줍니다.

프로토콜

1. 만능 줄기 세포와 희소돌기아교세포 성숙에서 인간 희소돌기아교세포 전구세포(OPC) 유도

1. NPC(Neural Progenitor Cell) 생성: 단층 프로토콜(~7일). 흐름도는 그림 1A를 참조하십시오.
   1. 52의 통로에서 시판되는 H1 인간 ES 세포를 사용합니다(재료 표 참조). ES 세포 유지 배지(재료 표 참조)를 사용하여 세포외 기질 용액으로 코팅된 6-well 플레이트(6-well 플레이트당 ~0.5mg의 매트릭스 용액, 재료 표 참조)에서 세포를 배양하고 37°C에서 5% CO₂로 플레이트를 배양합니다.
   2. 이중 SMADi라는 확립된 접근 방식을 통해 세포를 신경 전구 세포(NPC)로 트랜스 분화하며, 여러 신호 경로를 위한 소분자 억제제를 사용합니다. 여기에서는 널리 사용되는 상용 키트를 사용하고 제조업체에서 제공하는 단층 프로토콜을 따릅니다(재료 표 참조).
   3. Day -1에서, 배아 줄기(ES) 세포 유지 배지(Table of Materials)가 있는 성장 인자 감소 매트릭스 용액(....

결과

그림 1: iOPC(유도 희소돌기아교세포 전구세포) 생성 및 iOL(유도 희소돌기아교세포) 성숙. (A) iOPC 및 iOL 생성의 흐름도. (B) 15일차 iOPC의 대표적인 명시야 및 면역형광 이미지. Olig2(범-올리고아덴드로글리아 마커)는 녹색, O4(OPC 마커)는 빨간색, DAPI는 파란색으로 표시됩니다. 이미징 결과 iOPC의 >95%가 O4에 양성이고 25%가 Olig2에 양성인 것으로 나타났습니다. (C) 28일차 iOL의 대표적인 명시야 및 면역형광 이미지. MBP는 녹색, O1은 빨간색, DAPI는 파란색으로 표시됩니다. (D) NPC 마커 PAX6의 발현은 14일째에 iO.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
아카쿠타아제	스템셀 테크놀로지스	7920
B27 보충제	써모피셔	17504044
bFGF	써모피셔	PHG 0266 (영문
캠프	밀리포어시그마	A9501
클레마스틴	밀리포어시그마	SML0445
DMEM/F12 매체	스템셀 테크놀로지스	36254
디엠소	써모피셔	D12345
소 태아 세럼	사이엔셀	10
H1 인간 ES 세포	위셀	와01
마트리겔	코 닝	354234
mTeSR 플러스	스템셀 테크놀로지스	5825
N2 보충제	써모피셔	17502001
Neurobasal A 배지	써모피셔	제10888-022
비 필수 아미노산	써모피셔	제11140-050
PDGF-AA〈블랙	R&D 시스템	221-AA-010
pMDLg/pRRE	애드진	12251
폴리브레네	밀리포어시그마	TR-1003-G
pRSV-레브	애드진	12253
ROCK 억제제 Y-27632	스템셀 테크놀로지스	72302
처짐	토크리스	4366
STEMdiff 신경 전구 냉동 매체	스템셀 테크놀로지스	5838
STEMdiff SMADi 신경 유도 키트	스템셀 테크놀로지스	8581
T3 트리요오드티로닌	밀리포어시그마	T6397
Tempo-iOlogo: 인간 iPSC 유래 OPC	템포 바이오사이언스	SKU102
TetO-NG2-Puro	애드진	52047
브이에스이브이-지	애드진	12259

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