확산성 내인성 폰틴 신경교종(Diffuse Intrinsic Pontine Glioma)으로부터 세포 분리 및 배양(Isolating and Culturing Cells from Diffuse Intrinsic Pontine Glioma)

초록

출처: Lin, G. L. et al., 미만성 내인성 폰틴 신경교종(DIPG)의 신속한 사후 세포 배양을 위한 프로토콜.J. Vis. 특급 (2017)

이 비디오는 미만성 내인성 폰틴 신경교종 또는 DIPG에 영향을 받은 뇌간 조직에서 신경교전구세포를 분리하고 배양하는 과정을 보여줍니다. 효소 소화를 통해 종양 조직에서 분리된 신경교세포는 신경기저 배지에서 배양되어 성장과 자유롭게 떠다니는 신경구의 발달을 촉진합니다.

프로토콜

인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 제도적, 국가적, 국제적 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회의 검토를 거쳤습니다.

1. 조직 샘플 얻기

참고: 이 프로토콜의 중요한 구성 요소는 부검 시점 즉시 조직 기증을 적절하게 처리해야 합니다. 전체 검체 생존 가능성은 PMI(Post-Mortem Interval)를 최소화하고, 조직을 항생제/항진균제가 보충된 적절한 저온 매체로 즉시 옮기고, 운송 내내 검체를 젖은 얼음 위에 보관하고, 프로토콜 전반에 걸쳐 멸균 기술을 유지하는 데 크게 좌

우됩니다.

1. 기증이 임박했다는 통지를 받으면 샘플 수집 키트를 준비합니다. 조직 샘플의 반송 운송에 직접 사용할 수 있는 절연 용기가 있는 배송 상자를 사용하여 다음 재료를 포함하십시오.
   1. 멸균 장갑, 커튼 및 메스를 포함한 멸균 준비용 재료를 포함합니다.
   2. 30mL 운송 매체가 들어 있는 8 - 10개의 멸균 50mL 원뿔형 튜브를 얼음 또는 냉팩과 함께 절연 용기에 포함합니다.
      메모: 모든 표준....

결과

그림 1. 폰틴 종양의 부검 샘플. 미만성 내인성 폰틴 신경교종(diffuse intrinsic pontine glioma)의 즉각적인 사후 소견. 종양은 교두의 복부 표면에 크고 수초가 풍부한 덩어리로 나타납니다.

그림 2. 다양한 처리 단계에서 조직 샘플.(A) 멸균 부검 절차와 젖은 얼음에 익일 배송하여 샘플을 얻습니다. (B) 왼쪽에서 오른쪽으로: (1행) 선적 매체에 종양 조직을 포함하는 튜브.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
최대 절전 모드-A	지브코	A12475-01
칼슘/마그네슘을 함유한 HBSS	지브코	제24020-117
HBSS (하이브에스)	코 닝	21-022-이력서
헤페스	지브코	제15630-080
리베아제 DH (콜라겐분해효소/디스파제)	로슈	5401054001
DNAse I	워딩턴 생화학	LS002007
자당	시그마	S0389
항생제/항진균제	지브코	제15240-096
뉴로베이스알-A	지브코	제10888-022
DMEM/F12	지브코	제11330-032
글루타맥스-I (100배)	지브코	제35050-061
피루브산나트륨 (100mM)	지브코	제11360-070
B27 보충제 - 비타민 A	지브코	제12587-010
MEM 비필수 아미노산 (100X)	지브코	제11140-050
인간 PDGF-AA	셰넌도어 생명공학	100-16
인간 PDGF-BB	셰넌도어 생명공학	100-18
인간 EGF	셰넌도어 생명공학	100-26
인간 FGF	셰넌도어 생명공학	100-146
멸균 메스 블레이드	음유시인 페이커	372610
곡선형 지혈기	정밀 과학 도구	13013-14
면도날	폭스바겐	55411-050
100 x 20mm 세포 배양 접시	코 닝	353003
멸균 겸자	TWD 트레이드윈즈	재질 보기 DF8988-5
멸균 커튼	3엠	2037
멸균 장갑	킴벌리 클라크	1182307
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