Labeling Neural Cell Surface Markers with Azidosugar(아지도슈가(Azidosugar)를 사용한 신경 세포 표면 마커 라벨링(Labeling Neural Cell Surface Markers with Azidosugar) 및 내피 세포(Endothelial Cells)와의 공동 배양

초록

출처: Bai, Q., et al. Sialoglycan의 대사 표지에 의하여 1차 신경 줄기 그리고 전구 세포의 세포 표면 마커를 확인. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 쥐의 뇌 내피 세포와 1차 피질 줄기 세포를 공동 배양하고 Ac4ManNAz(azidosugar per-O-acetylated N-azidoacetylmannosamine)를 사용하여 세포 표면 당단백질을 라벨링하는 프로토콜을 보여줍니다. 이 방법을 사용하면 일차 세포에서 세포 표면 단백질을 선택적으로 농축하고 식별할 수 있습니다.

프로토콜

1. 투과성 지지 삽입물에서 마우스 내피 배양 준비

참고: BEND3 셀은 제조업체의 지침에 따라 유지됩니다.

1. 500mL의 DMEM에 FBS 50mL와 페니실린-스트렙토마이신 5mL를 첨가하고 잘 혼합하여 BEND3 세포 배지(BM)를 준비합니다.
2. 접시에서 배지를 흡인하고 BEND3 세포 배양액을 PBS 1mL로 한 번 세척합니다. 0.25% 트립신-EDTA(에틸렌 디아민 테트라아세트산) 1mL를 세포에 첨가하고 37°C에서 4분 동안 배양합니다.
3. 세포에 BM 1mL를 첨가하여 트립신-EDTA를 중화하고 위아래로 부드럽게 피펫팅하여 세포를 완전히 해리시킵니다. 세포 현탁액을 새로운 15mL 코니컬 튜브로 옮기고 400 x g에서 5분 동안 실온(RT)에서 원심분리하여 펠렛화합니다.
4. 튜브에서 상등액을 흡인하고 9mL의 새로운 BM으로 세포를 재현탁시킨 다음 1mL의 세포 현탁액을 하나의 투과성 지지 삽입체에 추가합니다. 매트릭스의 하단 챔버에 웰당 2mL의 새 BM을 더 추가합니다. 하루 동안 세포를 계속 배양합니다.

2. 신경-내피 공동 배양 및 Ac4ManNAz ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
굽힘3	증권 시세	CRL-229
DMEM을 참조하십시오.	지브코	11960044
L-글루타민	지브코	25030081	1%
나트륨 피루브산	시그마	P5280	1%
N2 보충제	지브코	17502048	1에서 100
N-아세틸-L-시스테인	시그마	A7250	1 밀리엠
B27 보충제	지브코	17504044	1에서 50
폴리-L-라이신	시그마	P4707
기본 섬유아세포 성장 인자	지브코	PHG0261	10 ng / mL
페니실린-스트렙토마이신	지브코	15140122	1%
소 태아 세럼	지브코	10099141	10%
HBSS (하이브에스)	지브코	14175095
트립신-EDTA, 0.25%	지브코	25200056
디피에스	지브코	14190094
트랜스웰	코 닝	3450

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