마우스 좌골 신경에서 슈반 세포의 자기 분리

초록

출처: Blusch, A., et al., 쥐 등뿌리 신경절 외식과 슈반 세포의 공동 배양에서 말초 축삭의 체외 수초화. J. Vis. 특급 (2023)

이 비디오는 쥐의 좌골 신경 섬유에서 슈반 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다.

프로토콜

1. 슈반 세포 배양

1. 슈반 세포 배양을 위한 코팅
   1. 멸균 상태에서 세포 배양 접시를 코팅합니다. 0.01% 폴리-L-라이신(PLL) 2mL를 각각 60mm 조직 배양(TC) 접시 2개에 적용하고 4°C에서 하룻밤 동안 배양합니다.
   2. PLL을 제거하고 TC 접시를 증류수로 2번 씻고 4°C에서 하룻밤 동안 1μg/cm² 라미닌 2mL로 배양합니다. TC 접시를 아쿠아 데스트로 2번 씻고 접시를 자연 건조시킵니다.
2. 슈반 세포 배양을 위한 배지 준비
   1. 멸균 조건에서 Dulbecco의 Modified Eagle's Medium(DMEM)/F-12(고포도당)에 10% 열 비활성화 태아 송아지 혈청(FCS), 2μM 포스콜린, 10nM 뉴레굴린 및 50μg/mL 겐타마이신을 첨가하여 50mL의 Schwann 세포 배지를 준비합니다.
   2. 멸균 조건에서 50μg/mL 겐타마이신이 포함된 Leibovitz의 L-15 배지 70mL를 준비합니다.
3. 좌골 신경의 효소 소화
   참고: 다음 단계는 멸균 상태에서 수행됩니다.
   1. 10....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
소 혈청 알부민	Carl Roth, 독일 카를스루에	8076.4
셀 스트레이너, 100 μM	BD Bioscience, 하이델베르크, 독일	제352360
원심분리기 5810-R	Eppendorf AG, 함부르크, 독일	5811000015
CO2 인큐베이터 Heracell	Heraeus Instruments, 하나우, 독일	51017865
디스플레이 II	Sigma Aldrich GmbH, 슈타인하임, 독일	4942078001
증류수(정수 시스템)	Millipore, Molsheim, 프랑스	ZLXS5010Y
DMEM/F-12, 글루타맥스	Thermo Fisher Scientific, 독일 슈베르테	31331093
DPBS(칼슘 이온 및 마그네슘 이온 없음)	Sigma Aldrich GmbH, 슈타인하임, 독일	D8537-6X500ML
증권 시세	Sigma Aldrich GmbH, 슈타인하임, 독일	F7524	FCS는 슈반 세포 배양을 위해 테스트해야 합니다
겐타마이신	Thermo Fisher Scientific, 독일 슈베르테	5710064
HBSS(칼슘 이온 및 마그네슘 이온 없음)	Thermo Fisher Scientific, 독일 슈베르테	14170138
라미닌	Sigma Aldrich GmbH, 슈타인하임, 독일	L2020-1MG
MACS 멀티스탠드	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, 독일	130042303
마이크로 가위	Fine Science Tools GmbH, 하이델베르크, 독일	15000-08
현미경	Motic, Wetzlar, 독일	모틱 BA 400
현미경 슬라이드	VWR, 래드너, 미국	630-1985
MiniMACS 분리기	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, 독일	130091632
MS 컬럼	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, 독일	Tel.: 130-042-201
노이바우어 계수 챔버	어시스턴트, 독일 에를랑겐	40441
피 펫	Eppendorf AG, 함부르크, 독일	2231300004
폴리-L-라이신	Sigma Aldrich GmbH, 슈타인하임, 독일	P4707-50ML
혈청학적 피펫, 10 mL	Sarstedt, Nümbrecht, 독일	861254025
혈청학적 피펫, 25 mL	Sarstedt, Nümbrecht, 독일	861685001
혈청학적 피펫, 5 mL	Sarstedt, Nümbrecht, 독일	861253001
TC 접시 60, 셀 +	Sarstedt, Nümbrecht, 독일	833901300
Thy-1 마이크로비즈(MACS 키트)	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, 독일	Tel.: 130-094-523
트립신-EDTA (0.05%), 페놀 레드	Thermo Fisher Scientific, 독일 슈베르테	제25300-054
유형 I 콜라겐 분해 효소	Sigma Aldrich GmbH, 슈타인하임, 독일	C1639
수조 유형 1008	GFL, 부르크베델, 독일	4285

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