Isolating Immune Cells from Mouse Choroid Plexuses

초록

출처: Dominguez-Belloso, et al. 미세 절개 마우스 맥락막신경총에서 면역 세포의 격리 및 특성화. J. Vis. 특급 (2022년)

이 비디오는 마우스 맥락막신경총에서 면역 세포를 분리하는 절차를 보여줍니다. 이 절차는 맥락막신경총의 면역 세포가 뇌 건강과 다양한 신경 질환에 어떤 영향을 미치는지 이해하기 위한 신경 면역학 연구에 사용됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 재료 준비

1. MACS(Magnetic-activated Cell Sorting) 완충액: 2mM 에틸렌 디아민 테트라아세트산(EDTA) 및 0.5% 소 혈청 알부민(BSA)(재료 표)을 PBS-/-로 준비합니다.
2. 콜라겐 분해 효소 IV 원액 (20 U/μL) : 분말을 PBS + / + (재료 표)에 재현탁시키고 분취 및 -20 ° C에서 보관하십시오 .
   메모: 콜라겐분해효소 IV는 MgCl2가 완전히 활성화되어야 합니다. 콜라겐분해효소 IV 용액을 동결-해동하지 마십시오.
3. 마취 진통제: PBS-/-.
   1mL에 케타민 150μL, 자일라진 25μl(5mg/kg) 및 부프레케어(0.1mg/kg) 330μl를 혼합합니다. 메모: 마취 진통제 용액을 즉석에서 준비하고 하루 이상 보관하지 마십시오.
4. 헤파린 용액 (100 U/mL) : 분말을 PBS-/-에 재현탁시킵니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
안티 마우스 CD16/CD32	BD 바이오사이언스	553142	유세포분석 항체
알부민, 소	MP 바이오메디컬	160069	차단 시약
APC 안티 마우스 CX3CR1	바이오레전드	149008	유세포분석 항체
APC 안티 마우스 TCRb	바이오레전드	109212	유세포분석 항체
APC-Cy7 안티 마우스 CD4	바이오레전드	100414	유세포분석 항체
APC-Cy7 안티 마우스 IA-IE	바이오레전드	107628	유세포분석 항체
BD FAC심포니 A5 세포 분석기	BD 바이오사이언스		유세포 분석 분석기
BV711 안티 마우스 Ly6C	바이오레전드	128037	유세포분석 항체
콜라겐분해효소 IV	지브코	제17104-019	CP 조직을 해리하는 효소
다피	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	62248	라이브/데드 마커
에디타			이온 킬레이터
고급 가위	증권 시세	14058-11	해부 도구
FITC 안티 마우스 CD45	바이오레전드	103108	유세포분석 항체
흐름 컨트롤러 주입 삽입	케어퓨전	RG-3-C	혈액 관류 삽입
FlowJo 소프트웨어	BD 바이오사이언스		해석 소프트웨어
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PBS+/+	지브코	제14040-091	완충기
PE 안티 마우스 CD8a	바이오레전드	100708	유세포분석 항체
PE 안티 마우스 F4/80	바이오레전드	123110	유세포분석 항체
PE-Dazzle 594 안티 마우스 CD11b	바이오레전드	101256	유세포분석 항체
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베테르게시치	세바		부프레노르핀, 진통제

호 ) 표시기 년 표시기 년 호 호 년