마우스 뇌에서 내측 시상-전방 대상피질 절편의 생성

초록

출처: Lu, H., et al. 직류 자극 및 마우스 뇌 슬라이스 준비에서 발작과 같은 활동의 다중 전극 어레이 기록. J. Vis. 특급 (2016년)

이 비디오는 쥐의 뇌에서 MT-ACC(Medial thalamus-anterior cingulate cortex) 절편을 준비하는 방법을 보여줍니다. 쥐의 뇌를 해부하고, MT-ACC 경로를 노출시키기 위해 절단하고, 진동을 사용하여 절편을 생성합니다. 그런 다음 MT-ACC 절편은 산소가 공급된 인공 뇌척수액에서 유지됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 브레인 슬라이스 준비

1. 4-8주 된 수컷 C57BL/6J 마우스를 사용하십시오. 동물을 에어컨이 설치된 방(21-23°C, 습도 50%, 12시간/12시간 조명/어둡게 주기, 오전 8:00에 점등)에 보관하고 음식과 물을 무료로 이용할 수 있습니다.
2. 인공 뇌척수액(aCSF) 분취액 250ml를 얼음이 들어 있는 비커에 넣습니다. 동시에 95 % O₂ 및 5 % CO₂ 로 구성된 연속 가스를 공급하십시오.
3. 외과
   1. 유리 상자에 4% 이소플루란으로 동물을 약 3분 동안 마취합니다. 동물이 외과적 마취 깊이에 도달하면(발가락 꼬집음에 대한 반응이 없는 것으로 나타남) 으깬 얼음으로 채워진 얕은 쟁반에 동물을 놓고 가위로 머리를 제거합니다.
   2. 두개골을 드러내고 남은 근육을 잘라냅니다. 다음으로, 롱거스를 사용하여 뇌에서 두개골의 등쪽 표면을 벗겨냅니다. 롱거를 사용하여 두개골의 측면을 다듬습니다. 모든 수술 기구를 75% 에탄올 용액으로 소독합니다.
   3. 주걱을 사용하여 뇌의 복부 표면을 따라 후각구와 신경 연결을 절단하고 뇌를 제거합니다. 참수 후 뇌를 얼음처럼 차가운 산소가 공급된 비커로 빠르게 옮깁니다.
4. 내측 시상(MT)-전방 대상피질(ACC) 뇌 슬라이스
   의 준비 메모: MT에서 ACC로의 경로를 포함하는 슬라이스를 준비합니다.
   1. 각 반구의 정중선 옆으로 2.0mm 떨어진 두 개의 시상면으로 뇌 블록을 손으로 잘라 피질하 해부학적 구조를 표시합니다. 그런 다음 두 개의 각도로 자릅니다. 선조체에서 보이는 섬유 관과 평행하게 첫 번째 교차 절단을 만듭니다.
   2. 소뇌와 시각 피질 사이의 연결에서 복부에 있고 시상 경로와 평행한 전방 커미셔와 시관 사이의 중간 지점까지 두 번째 교차 절단을 합니다.
   3. 시아노아크릴레이트 접착제로 뇌 블록을 각진 판(~120°)에 부착하고 경로의 전환점 바로 위를 절단합니다. 플레이트를 펼치고 평평하게 펴서 비브라톰의 챔버 스테이지에 붙입니다.
   4. 내측 시상-ACC 뇌 절편(500μm 두께)을 만든 다음 얼음처럼 차가운 산소가 공급된 aCSF에 담급니다. 슬라이스를 기록 챔버로 옮기고 산소화된 aCSF와 함께 연속 관류(12ml/분) 상태에서 32°C에서 1시간 동안 유지합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
마 취:
이소플루란	Halocarbon 제품 공사	재질 보기 NDC 12164-002-25	4%
aCSF (합계:1L):
D(+)-포도당	머 크	1.08337.1000	10 밀리미터미터
탄산수소나트륨	머 크	1.06329.0500	25 밀리미터미터
소금	머 크	1.06404.1000	124 밀리미터미터
(+)-L-아스코르브산나트륨, >=98%	시그마	A4034-100지	0.15g / 2 콘셉트
황산마그네슘, 무수, ReagentPlus	시그마	M7506-500G	2 밀리엠
염화칼슘 이수화물	머 크	1.02382.1000	2 밀리엠
나트륨 이수소 인산염 일 수화물	머 크	1.06346.1000	1 밀리엠
염화칼륨	May & Baker LTD Dagenham, 영국	MS 7616 (영문	4.4 밀리미터.

)