Constructing Patterned Neuronal Circuits on a Multi-Electrode Array

Abstract

출처: Kanner, S., et al. 기능적으로 상호 연결된 회로로 구성된 모듈식 뉴런 네트워크의 설계, 표면 처리, 세포 도금 및 배양. J. Vis. 특급 (2015)

이 비디오는 모듈러 뉴런 네트워크를 구축하기 위해 패턴화된 다중 전극 어레이(MEA)에서 뉴런 세포를 배양하는 과정을 보여줍니다. 이 방법을 사용하면 신경 신호 전달 및 세포 상호 작용을 연구할 수 있습니다.

Protocol

1. 다중 전극 어레이(MEA) 준비

1. 다음 순서로 MEA 청소(재료 표):
   1. 수돗물로 씻고 농축 효소 세제에 3회 초음파 처리합니다.
   2. 증류수에 3회 초음파 처리합니다.
   3. 증류수(후드, 1,000μl 팁)로 3회 세척하고 자외선(UV) 아래에 30분 동안 놓습니다.
2. 네트워크 준비 지원:
   1. 설계된 지원 네트워크 금형을 준비합니다.
      1. 폴리디메틸실록산(PDMS)을 12웰 플레이트(직경 22mm)에 붓습니다.
      2. PDMS가 경화되면 금형을 제거하고 메스를 사용하여 중간에 구멍을 뚫어 링 모양을 만듭니다.
      3. 설계된 지지 네트워크 금형을 MEA 중앙에 배치하고(그림 1A) 실온(RT)에서 2시간 동안 폴리-D-라이신(PDL)으로 나머지 표면을 덮습니다.
   2. 피펫을 사용하여 PDL을 제거하고 증류수로 세척합니다.
   3. 곰팡이를 제거하고 건조시킵니다(그림 1A).
3. 다음과 같은 방법으로 스텐....

Results

그림 1. PDMS는 MEA에 증착을 구조화합니다. (A) MEA에 장착된 링 모양(빨간색 화살표로 표시)이 있는 PDMS 금형. 곰팡이는 지지 신경 세포망으로 향하고 배양 영역의 주변에 위치한 영역을 코팅하는 데 사용됩니다(이는 MEA에 장착되고 녹색 화살표로 표시된 링에 의해 제한됨). (B) 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 MEA에서 PDMS 스텐실을 정렬하는 단계. (C) 정렬 후 MEA에 증착된 PDMS 스텐실. (D) 10배 배율을 사용한 MEA의 PDMS 스텐실 이미지(전극 간 거리는 500μm). 전극에 따라 스텐실의 구멍을 기록하는 것이 가능합니다. 세포 접착을 선호하는 접착 층은 개방 된 영역에만 증착됩니다.

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
PDMS, 실가드 184	다우코닝
Nalgene 진공 챔버	열	5305-0609
폴리-D-라이신 PDL	시그마	P7886
12 우물 문화 플레이트	시그마	CLS3336
5-플루오로-2'-데옥시우리딘	시그마	F0503
MEA1060-Inv-BC	다중 채널 시스템
TC02	다중 채널 시스템
펜 스트렙	생물 산업 Beit Haemek	03-033-1씨
나-27	지브코	17504044
글루타맥스	지브코	제35050-038
MEM 최소 필수 매체 - 이글	생물 산업 Beit Haemek	01-025-1B
마이크로 전극 어레이 4Q	다중 채널 시스템	60-4QMEA1000iR-티-PR	청소 설명서 : http://www.multichannelsystems.com