mouse brain slice에서 GABA Puffing을 사용한 전체 세포 전류 기록

초록

출처: Feng, Y. et al., 뇌 절편에서 GABA의 퍼프 적용에 의해 유도된 전체 세포 전류.J. Vis. 특급 (2017)

이 비디오는 쥐의 전전두엽 피질 뇌 절편에서 감마 아미노부티르산(GABA)에 의해 유도된 전체 세포 전류를 기록하는 것을 보여줍니다. GABA의 제어된 전달은 시냅스후 뉴런에서 염화물 채널을 열어 억제성 시냅스후 전류 또는 IPSC를 생성합니다. 이러한 IPSC는 GABA 농도가 높을수록 증가하며, 이는 시냅스 전달에 대한 GABA의 억제 활성을 반영합니다.

프로토콜

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토 위원회에 의해 검토되고 승인되었습니다.

1. 솔루션 준비

1. 표 1에 나열된 대로 발표된 연구에 설명된 성분을 포함하는 표준 인공 뇌척수액(ACSF) 500mL를 준비합니다.
   1. 깨끗한 유리 비커에 탈이온수를 사용하여 새로운 ACSF 용액을 준비합니다. 염화나트륨 (NaCl), 염화칼륨 (KCl), 인산나트륨 나트륨 (NaH₂PO₄ ), 중탄산 나트륨 (NaHCO₃ ), 황산 마그네슘 (MgSO₄ ), D- 포도당을 첨가하기 전에 탈이온수로 주걱을 세척하고 건조시키고 용액을 95 % O₂ / 5 % CO₂ 로 거품을 낸 후 염화칼슘 (CaCl₂ ) 을 첨가합니다.~20분(표 1에 자세히 설명됨) 동안 500mL의 탈이온수 혼합물. 완전히 녹을 때까지 저어줍니다.
   2. ACSF가 강수량 없이 완전히 깨끗한지 확인하십시오. 그런 다음 pH를 7.2-7.4로 조정합니다. 95% O₂ 및 5% CO₂로 구성된 가스....

결과

그림 1. 퍼프 마이크로피펫 및 기록 전극의 다이어그램.
(A) 퍼프와 기록 마이크로피펫 사이의 거리. (나) 뇌 절편 표면에 있는 퍼프 마이크로피펫(왼쪽)과 기록 전극(오른쪽).

그림 2. GABA 퍼프에 의해 유도된 IPSC의 픽크로톡신 봉쇄.
(가) ACSF 및 자당(50μM)을 퍼핑하면 반응이 없습니다.(B) 50.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
유리 붕규산 마이크로피펫	셔터 계기판	BF150-86-10	1.50 mm 외경; 0.86 mm 내경
마이크로피펫 풀러	셔터 계기판	모델 P-97	플레밍/브로우 마이크로피펫 풀러
마이크로 매니퓰레이터	셔터 계기판	MP-285
컴퓨터 제어 증폭기	분자 장치	멀티클램프 700B
디지털 수집 시스템	분자 장치	디지데이터 1440A
이미징 카메라	니콘	2115001	검사 장비
현미경 검사 법	니콘	이클립스 FN1
마스터 8	A.M.P.I.	Master-8 펄스 자극기
비브라톰 슬라이서	라이카	VT 1000S
Picospritzer	파커 하니핀		세포 연구에서 피콜리터 부피 배출을 위한 압력 시스템
면도날	질 레트	74-S	플라잉 이글
비디오 모니터	파나소닉	WV-BM 1410
502 접착제	델리	7146	시아노아크릴레이트 접착제
연동 펌프	상하이 JIA PENG 공사	BT100-1층
비디오 카메라	올림푸스 아메리카 메디컬	올리-150
파이펫 이송	바이오로직스	제30-0138A1

(검정) 시리즈 년 년 호