Establishing a Whole-Cell Patch Clamp for Electrophysiological Recording from a Flat-Mount Mouse Retina

초록

출처: Tu, H., et al. 탈아페렌트화된 마우스 망막의 플랫 마운트 제제에서 스타버스트 무축삭 세포의 패치 클램프 기록. J. Vis. 특급 (2016).

이 비디오는 플랫 마운트 마우스 망막에서 전기 생리학적 기록을 위한 전체 세포 패치 클램프 기술을 보여줍니다. 전극이 있는 얇은 유리 피펫을 사용하여 망막 내의 별방울 무축삭 세포(SAC)에 접근합니다. 씰을 형성한 후 흡입이 가해져 멤브레인을 파열하고 전체 세포 패치 클램프 구성을 형성합니다. 마지막으로, SAC 시냅스 수용체를 통한 이온의 흐름은 구성을 사용하여 측정됩니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 외부 및 내부 솔루션

1. 포유류 Ringer's solution을 망막 박리 중에 사용하고 후속 전기 생리학적 기록에서 외부 솔루션으로 사용합니다. 기록 당일 10x 원액(칼슘 없음)에서 포유류 Ringer's solution을 준비하고 발암 15분 후(95% O₂ 및 5% CO₂) CaCl₂를 적가합니다. 최종 1x 용액에는 120 NaCl, 5 KCl, 25 NaHCO₃, 0.8 Na₂HPO₄, 0.1 NaH₂PO₄, 2 CaCl₂, 1 MgSO₄ 및 10 D-포도당이 포함됩니다.
2. 두 가지 내부 솔루션을 사용하여 SAC 진동을 특성화할 수 있습니다. 성체 마우스 망막 신경절 세포(RGC)에 대한 장기간의 전체 세포 패치 클램프 기록에서 준비된 용액의 유용성을 테스트하고 검증된 배치를 사용할 때까지 -20°C에서 500μl 분취량에 보관합니다.
   1. 막 전위 진동을 기록하려면 125K-....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
DIC를 사용한 고정 스테이지 형광 현미경	올림푸스	BX51-위스콘신
마이크로 매니퓰레이터	셔터	MP-225
패치 클램프 증폭기	A-M 시스템	AM2400
AD 변환기	내셔널 인스트루먼트	NI-USB-6221
히터 컨트롤러	워너 인스트루먼트	TC-324B
인라인 히터	워너 인스트루먼트	사우스 캐롤라이나-20
연동 펌프	라이닌	다이나맥스
피펫 풀러	셔터 계기	P-1000
필라멘트가 있는 유리관	킹 프리시전 글래스	주문을 받아서 만들어진
자극	A.M.P.I.	마스터-8
바이오사이틴	시그마	나4261
염화나트륨	시그마	S6191
케이클	시그마	P5405
나HCO3	어부	BP328-1
나2HPO4	시그마	S0876
나H2PO4	시그마	S5011
염화칼슘2	시그마	C5670 (영문
재질 보기 MgSO4	시그마	M1880
D-포도당	시그마	G6152
K-글루코네이트	시그마	G4500
ATP-마그네슘	시그마	A9187
재질 보기 Li-GTP	시그마	G5884
에그타	시그마	0396회
헤페스	시그마	H4034
코	시그마	P5958
Cs-메탄설포네이	시그마	C1426 (영문
씨에스오	시그마	232041
주사기 필터	날진	171
주사기 1ml	라이닌	17013002
10 ul 피펫 팁	제네시 사이언티픽	24-130RL
10X PBS	론자	17-517큐