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방법 논문

뇌 절편에 있는 신경 세포의 동시 광학 및 전기 생리학적 모니터링

799 조회수

⸱

2025년 7월 8일

이 논문에서

초록

출처: Murphy, C. A., et al. 뇌 절편에서 구심성 경로의 광유전학적 활성화 및 휘발성 마취제에 의한 반응 조절. J. Vis. 특급 (2020)

이 비디오는 뉴런 특이적 형광 단백질을 포함하는 형질전환 뇌 절편에서 전기 활동을 동시에 이미징하고 기록하는 방법을 설명합니다. 이 절차에는 폭기된 인공 뇌척수액이 있는 관류 챔버에서 뇌 절편을 유지하고, 광원을 사용하여 형광 표지된 세포를 여기시키고, 다중 채널 프로브 및 패치 클램프로 전기 신호를 기록하는 것이 포함됩니다.

프로토콜

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토 위원회에 의해 검토되고 승인되었습니다.

1. 다중 채널 녹음을 위한 하드웨어 및 소프트웨어 준비

  1. 제조업체 지침에 따라 16채널 데이터 수집 시스템을 설정합니다.
    메모: 여러 상용 증폭기 및 데이터 수집 시스템을 사용하여 다중 채널 녹음을 수집할 수 있습니다. 여기에 설명된 실험에서 아날로그 신호는 전극 참조 패널을 통해 두 개의 증폭기로 전달되며, 여기서 증폭(2000x) 및 필터링(0.1-10kHz)됩니다. 데이터 수집 시스템에 대한 아날로그 입력은 40kHz에서 디지털화됩니다.
  2. 적절한 16채널 헤드 스테이지 어댑터를 현미경 마이크로 매니퓰레이터에 고정합니다. 암 커넥터 포트가 아래를 향하도록 어댑터의 방향을 지정합니다.
  3. 이 마이크로 매니퓰레이터의 작동 각도를 조정하여 수평을 기준으로 약 70° 각도로 녹음 챔버를 향해 아래쪽을 향하도록 합니다.
  4. 헤드 연결tage 입력을 통해 체외 전기 생리학을 위한 16 x 1 프로브에 연결합니다.tage 마이크로 매니퓰레이터에 고정된 어댑터.
  5. 헤드 스테이지....

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공개 사항

선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
2.5x 광시야 대물 렌즈올림푸스MPLFLN2.5배
40x Water Immersion 대물 렌즈올림푸스LUMPLFLN40XW
95% O2/5% CO2 혼합물에어가스Z02OX95R2003045
A16 프로브뉴로넥서스(NeuroNexusA16x1-2mm-100-177-A1616채널 프로브
마취 가스 모니터(POET II)크리티케어602-3ᅡ
염화칼슘 (CaCl2)닷 사이언티픽DSC20010증권 시세
모세관 유리(패치 클램프 녹음)킹 정밀 유리, Inc.KG-33붕규산염, ID: 1.1mm, OD: 1.7mm, 길이: 90.0mm
모세관 유리(바이러스 주사)드러먼드 사이언티픽 컴퍼니3-000-203-G/X3.5인치
주니어 micromanipulator 제어루이그스와 노이만SM8주니어 MicroManipulator 제어용
매니퓰레이터 및 이동 테이블 제어루이그스와 노이만SM7Multichannel Electrode 및 Shifting Table 제어용
디지데이터 1440A + 클램프펙스 10분자 장치1440ᅡ디지타이저 및 소프트웨어
E-3603 튜빙피셔 사이언티픽1417120895% O2/5% CO2 가스 혼합물을 배양 챔버로 전달 + 패치 클램핑 중 압력 가압
에그타닷 사이언티픽DSE57060세포내 솔루션
ERP-27 EEG 참조/패치 패널뉴럴릴스은퇴한
충전 바늘세계적인 정밀 기기50821912패치 클램프 피펫 주입용
EYFP 이미징을 위한 필터 큐브올림푸스U-MRFPHQ
여과지피셔 사이언티픽09801E조직 블록을 준비하는 동안 슬라이스 템플릿 위에 놓기
화염/갈색 마이크로피펫 풀러셔터 계기P-10002.5x2.5 박스 필라멘트
가스 분산 튜브시그마 알드리치CLS3953312C
유리 주사기(100mL)시그마 알드리치Z314390가스 밀봉 백 충전용
글루콘산, 칼륨염(K-글루코네이트)닷 사이언티픽DSG37020세포내 솔루션
포도당닷 사이언티픽DSG32040증권 시세
GTP, 나트륨 염시그마 알드리치G8877세포내 솔루션
헤드스테이지-프로브 어댑터뉴로넥서스(NeuroNexusA16-OM1616채널 프로브를 헤드스테이지 입력에 연결하기 위한 어댑터
헤페스닷 사이언티픽DSH75030ACSF, 세포내 용액
HS-16 헤드스테이지뉴럴릴스은퇴한
이소플루란패터슨 수의학TEL.07-893-1389
이소프로필 알코올 (70%)VWR 국제공항제101223-746
주니어 마이크로 매니퓰레이터루이그스와 노이만210-100 000 0090-RPatch Clamp 전극의 조작을 위해
LED 광원 제어 모듈마이텍스BLS-PL02_US광유전학 광원 제어
Lynx-8 앰프뉴럴릴스은퇴한
Lynx-8 전원 공급 장치뉴럴릴스은퇴한
황산마그네슘(MgSO4)닷 사이언티픽DSM24300증권 시세
mCherry, 텍사스 레드 필터 큐브크로마49008tdTomato 형광 리포터 이미징용
멜록시캠
마이크로피펫 홀더피셔 사이언티픽NC9044962
마이크로 주사기 펌프세계적인 정밀 기기UMP3-4 (영어
멀티클램프 700A분자 장치/축삭 기기700ᅡ증폭기
질소(에어 테이블용)에어가스NI200
나일론 메쉬피셔 사이언티픽501460083납작한 백금 와이어의 말굽 위로 뻗어 있는 Slice는 녹음 중에 그 위에 놓입니다
나일론, 팬티스타킹 컷일반 브랜드인큐베이션 챔버에서 슬라이스 플랫폼을 만드는 작은 조각, 백금 하프를 만들기 위한 단일 섬유
피펫닷 사이언티픽307조직을 리그로 옮기기 위해
백금 와이어VWR 국제공항BT124000플래티넘 하프를 만들기 위해 2cm, 평평하게
폴리곤400마이텍스DSI-E-0470-0617-000광유전학 광 전달 시스템, PolyScan2 소프트웨어와 함께 제공
염화칼륨(KCl)닷 사이언티픽DSP41000증권 시세
인산칼륨 (KH2PO4)닷 사이언티픽DSP41200증권 시세
밀봉된 가스 백피셔 사이언티픽109236
현미경용 이동 테이블루이그스와 노이만380FMU
중탄산나트륨 (HCO3-)닷 사이언티픽DSS22060증권 시세
염화나트륨(NaCl)닷 사이언티픽DSS23020ACSF, 세포내 솔루션
주사기(1mL), LuerLock 팁 포함피셔 사이언티픽309628패치 클램핑 중 압력 가공용
슬립 팁이 있는 주사기(1mL)WW 그레인저, Inc.AN-번호 19G384패치 클램프 피펫 주입용
주사기 필터VWR 국제공항66064-414
정립 현미경올림푸스BX51
와이폴 타월피셔 사이언티픽Tel.: 19-042-427
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