뇌 절편에 있는 신경 세포의 동시 광학 및 전기 생리학적 모니터링

초록

출처: Murphy, C. A., et al. 뇌 절편에서 구심성 경로의 광유전학적 활성화 및 휘발성 마취제에 의한 반응 조절. J. Vis. 특급 (2020)

이 비디오는 뉴런 특이적 형광 단백질을 포함하는 형질전환 뇌 절편에서 전기 활동을 동시에 이미징하고 기록하는 방법을 설명합니다. 이 절차에는 폭기된 인공 뇌척수액이 있는 관류 챔버에서 뇌 절편을 유지하고, 광원을 사용하여 형광 표지된 세포를 여기시키고, 다중 채널 프로브 및 패치 클램프로 전기 신호를 기록하는 것이 포함됩니다.

프로토콜

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토 위원회에 의해 검토되고 승인되었습니다.

1. 다중 채널 녹음을 위한 하드웨어 및 소프트웨어 준비

1. 제조업체 지침에 따라 16채널 데이터 수집 시스템을 설정합니다.
   메모: 여러 상용 증폭기 및 데이터 수집 시스템을 사용하여 다중 채널 녹음을 수집할 수 있습니다. 여기에 설명된 실험에서 아날로그 신호는 전극 참조 패널을 통해 두 개의 증폭기로 전달되며, 여기서 증폭(2000x) 및 필터링(0.1-10kHz)됩니다. 데이터 수집 시스템에 대한 아날로그 입력은 40kHz에서 디지털화됩니다.
2. 적절한 16채널 헤드 스테이지 어댑터를 현미경 마이크로 매니퓰레이터에 고정합니다. 암 커넥터 포트가 아래를 향하도록 어댑터의 방향을 지정합니다.
3. 이 마이크로 매니퓰레이터의 작동 각도를 조정하여 수평을 기준으로 약 70° 각도로 녹음 챔버를 향해 아래쪽을 향하도록 합니다.
4. 헤드 연결tage 입력을 통해 체외 전기 생리학을 위한 16 x 1 프로브에 연결합니다.tage 마이크로 매니퓰레이터에 고정된 어댑터.
5. 헤드 스테이지....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
2.5x 광시야 대물 렌즈	올림푸스	MPLFLN2.5배
40x Water Immersion 대물 렌즈	올림푸스	LUMPLFLN40XW
95% O2/5% CO2 혼합물	에어가스	Z02OX95R2003045
A16 프로브	뉴로넥서스(NeuroNexus	A16x1-2mm-100-177-A16	16채널 프로브
마취 가스 모니터(POET II)	크리티케어	602-3ᅡ
염화칼슘 (CaCl2)	닷 사이언티픽	DSC20010	증권 시세
모세관 유리(패치 클램프 녹음)	킹 정밀 유리, Inc.	KG-33	붕규산염, ID: 1.1mm, OD: 1.7mm, 길이: 90.0mm
모세관 유리(바이러스 주사)	드러먼드 사이언티픽 컴퍼니	3-000-203-G/X	3.5인치
주니어 micromanipulator 제어	루이그스와 노이만	SM8	주니어 MicroManipulator 제어용
매니퓰레이터 및 이동 테이블 제어	루이그스와 노이만	SM7	Multichannel Electrode 및 Shifting Table 제어용
디지데이터 1440A + 클램프펙스 10	분자 장치	1440ᅡ	디지타이저 및 소프트웨어
E-3603 튜빙	피셔 사이언티픽	14171208	95% O2/5% CO2 가스 혼합물을 배양 챔버로 전달 + 패치 클램핑 중 압력 가압
에그타	닷 사이언티픽	DSE57060	세포내 솔루션
ERP-27 EEG 참조/패치 패널	뉴럴릴스	은퇴한
충전 바늘	세계적인 정밀 기기	50821912	패치 클램프 피펫 주입용
EYFP 이미징을 위한 필터 큐브	올림푸스	U-MRFPHQ
여과지	피셔 사이언티픽	09801E	조직 블록을 준비하는 동안 슬라이스 템플릿 위에 놓기
화염/갈색 마이크로피펫 풀러	셔터 계기	P-1000	2.5x2.5 박스 필라멘트
가스 분산 튜브	시그마 알드리치	CLS3953312C
유리 주사기(100mL)	시그마 알드리치	Z314390	가스 밀봉 백 충전용
글루콘산, 칼륨염(K-글루코네이트)	닷 사이언티픽	DSG37020	세포내 솔루션
포도당	닷 사이언티픽	DSG32040	증권 시세
GTP, 나트륨 염	시그마 알드리치	G8877	세포내 솔루션
헤드스테이지-프로브 어댑터	뉴로넥서스(NeuroNexus	A16-OM16	16채널 프로브를 헤드스테이지 입력에 연결하기 위한 어댑터
헤페스	닷 사이언티픽	DSH75030	ACSF, 세포내 용액
HS-16 헤드스테이지	뉴럴릴스	은퇴한
이소플루란	패터슨 수의학	TEL.07-893-1389
이소프로필 알코올 (70%)	VWR 국제공항	제101223-746
주니어 마이크로 매니퓰레이터	루이그스와 노이만	210-100 000 0090-R	Patch Clamp 전극의 조작을 위해
LED 광원 제어 모듈	마이텍스	BLS-PL02_US	광유전학 광원 제어
Lynx-8 앰프	뉴럴릴스	은퇴한
Lynx-8 전원 공급 장치	뉴럴릴스	은퇴한
황산마그네슘(MgSO4)	닷 사이언티픽	DSM24300	증권 시세
mCherry, 텍사스 레드 필터 큐브	크로마	49008	tdTomato 형광 리포터 이미징용
멜록시캠
마이크로피펫 홀더	피셔 사이언티픽	NC9044962
마이크로 주사기 펌프	세계적인 정밀 기기	UMP3-4 (영어
멀티클램프 700A	분자 장치/축삭 기기	700ᅡ	증폭기
질소(에어 테이블용)	에어가스	NI200
나일론 메쉬	피셔 사이언티픽	501460083	납작한 백금 와이어의 말굽 위로 뻗어 있는 Slice는 녹음 중에 그 위에 놓입니다
나일론, 팬티스타킹 컷	일반 브랜드		인큐베이션 챔버에서 슬라이스 플랫폼을 만드는 작은 조각, 백금 하프를 만들기 위한 단일 섬유
피펫	닷 사이언티픽	307	조직을 리그로 옮기기 위해
백금 와이어	VWR 국제공항	BT124000	플래티넘 하프를 만들기 위해 2cm, 평평하게
폴리곤400	마이텍스	DSI-E-0470-0617-000	광유전학 광 전달 시스템, PolyScan2 소프트웨어와 함께 제공
염화칼륨(KCl)	닷 사이언티픽	DSP41000	증권 시세
인산칼륨 (KH2PO4)	닷 사이언티픽	DSP41200	증권 시세
밀봉된 가스 백	피셔 사이언티픽	109236
현미경용 이동 테이블	루이그스와 노이만	380FMU
중탄산나트륨 (HCO3-)	닷 사이언티픽	DSS22060	증권 시세
염화나트륨(NaCl)	닷 사이언티픽	DSS23020	ACSF, 세포내 솔루션
주사기(1mL), LuerLock 팁 포함	피셔 사이언티픽	309628	패치 클램핑 중 압력 가공용
슬립 팁이 있는 주사기(1mL)	WW 그레인저, Inc.	AN-번호 19G384	패치 클램프 피펫 주입용
주사기 필터	VWR 국제공항	66064-414
정립 현미경	올림푸스	BX51
와이폴 타월	피셔 사이언티픽	Tel.: 19-042-427

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