신경 활동을 이미지화하기 위해 형질전환 마우스의 뇌에 광학 창 설치

초록

출처: Lin, X., et al. Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 형질전환 마우스의 광학 창을 통해 뇌의 신경 활동을 기록하는 것을 보여줍니다. 쥐는 신경 활동을 감지할 수 있는 형광 단백질을 발현합니다. 두개골의 작은 부분을 조심스럽게 제거하여 광학 창을 설치하고, 두개골을 검은색 시멘트로 덮어 이미징 전에 빛을 차단합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 이미징을 위한 동물 준비

1. 멸균 거즈, 면봉 및 오토클레이브 수술 도구를 수술 부위에 놓습니다. 수술 도구의 수술 간 멸균을 위해 Micro Bead Sterilizer를 켭니다.
2. 케타민(17.2mg/mL), 자일라진(0.475mg/mL) 및 아세프로마진(0.238mg/mL)(체중 6μL/g)의 혼합물을 복강내 주사(ip)하여 마우스(남성 또는 여성, 1.5-2.5개월, 20-25g)를 마취합니다. 동물이 발가락 꼬집음 자극에 반응을 멈추고 각막 반사가 없을 때 적절한 마취 깊이에 도달할 때까지 기다립니다. 수술 중에는 원래 마취 상태를 유지하기 위해 필요에 따라 원래 마취 칵테일 용량의 1/3을 추가 용량으로 투
여합니다.
3. 수술 전에 진통제로 부프레노르핀을 피하주사(s.c.; 0.05–0.10 mg/kg)합니다. 각막 건조와 백내장 형성을 방지하기 위해 동물의 눈에 보호 연고를 바르십시오.
4. GCaMP6s 형질전환 마우스를 저체온증을 방지하기 위해 발열 패드에 놓고 멸균 수술용 드레이프로 덮습니다. 생쥐용 헤드 홀딩 어댑터(He....

결과

그림 1. 두개골에 양측 창을 만듭니다. (A) 사진 이미지는 S1 영역 위에 있는 두개골의 각 측면에 있는 2개의 두개골 광학 창을 보여줍니다. (B) 이미지의 박스형 영역의 고배율 (A) 기저 경막과 혈관을 노출시키는 양측 광학 창을 보여줍니다. 스케일 바 = 680μm. (C) 노출된 두개골. (D) 중앙 뼈 피판이 보이는 원형 홈의 생성. 스케일 바 = 900μm. (E) 뼈 피판을 제거한 후 두개골 개구부를 인공 뇌척수액(ACSF)으로 채웠습니다. 스케일 바 = 720 μm. (F) 두개골 개구부에 광학 창을 설치하고 창 가장자리를 슈퍼 접착제로 밀봉합니다. 경막과 혈관은 광학 창을 통해 볼 수 있습니다. 스케일 바 = 600μm.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
C57BL/6J-TG(Thy1-GCaMP6s)GP4.3DKIM/J	잭슨	24275	흥분성 뉴런의 부분 집합에서 녹색 형광 칼슘 지표인 GCaMP를 발현하는 유전적으로 암호화된 뉴런 지표 및 효과기에 의해 만들어진 모든 균주일 수 있습니다.
나6. Cg-Tg(Thy1-EGFP)OJrs/GfngJ입니다.	잭슨	7919	피질의 특정 집단 내에 있는 뉴런의 부분 집합에서 EGFP를 발현하는 모든 균주가 될 수 있으며, 밝고 생명력 있는 Golgi 같은 염색을 제공합니다.
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인공 뇌척수액(ASF)	-	-	ACSF는 125mM NaCl, 4.5mM KCl, 26mM NaHCO3, 1.25mM NaH2PO4, 2mM CaCl2, 1mM MgCl2 및 20mM 포도당을 포함합니다. ACSF에 산소(산소 95%, 이산화탄소 5%)를 거품을 일으키고 pH를 7.4로 조정합니다. 모든 실험 전에 새로운 ACSF 용액을 준비합니다.

피질의 년 년 년 년 년 년