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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. VEP 전극 이식
- 케타민(75mg/kg)과 메데토미딘(0.5mg/kg)의 복강 내 주사로 동물을 마취합니다.
메모: 마취 유도 후 금단 반사(핀치 테스트, 각막 및 손바닥 반사 등)와 그 부재를 관찰하여 수술을 시작하라는 표시로 삼습니다. 수술 내내 동물을 지속적으로 모니터링하고 반사가 있는 경우 추가 마취제(보충당 초기 케타민 용량의 10%)를 투여합니다. 성인 쥐 (>12 주)가 실험에 사용됩니다.
- 수술 부위의 피부를 면도합니다. 수술 중 체온을 유지하기 위해 동물을 보온 패드(37°C)에 올려 놓습니다. 포비돈 요오드의 국소 도포를 통해 피부를 준비합니다. 수술용 드레이핑을 적용합니다. 전신 마취 하에 각막 건조를 방지하기 위해 국소 안과 연고를 바르십시오. 멸균 기구를 사용하여 무균 상태를 유지하십시오.
- 머리 피부의 정중선에 세로로 피부를 절개합니다. 두개골이 잘 노출되도록 결합 조직을 청소합니다.
- 마이크로 핸드 드릴을 사용하여 브레그마 뒤쪽 7mm, 정중선 옆으로 3mm에 작은 버 구멍을 수동으로 조심스럽게 뚫습니다.
- 두개골을 통해 피질(영역 17)에 나사 전극을 이식하여 약 0.5mm 깊이까지 피질을 관통합니다. 브레그마의 정중선 3mm 상부에 기준 나사 전극을 이식합니다. 치과용 시멘트를 바르고 나사를 감싸고 고정합니다(항상 필요한 것은 아님).
- 머리 피부를 봉합하고, 피부에 항생제 연고를 투여하고, 동물이 마취에서 회복할 때까지 온열 패드에서 회복합니다.
참고: 또는 전극을 노출된 상태로 두어 각 녹음에서 피부를 다시 열 필요가 없도록 할 수 있습니다. 수술 중단 직후 마취 회복 전에 비스테로이드성 항염증제(NSAID)(수술 전에 투여되지 않은 경우) 또는 오피오이드 진통제를 투여합니다. 동물이 마취제에서 완전히 회복되어 보행할 수 있을 때까지 지속적으로 모니터링하십시오.
- VEP 기록 전에 동물이 수술에서 회복할 때까지 최소 1주일을 허용합니다.
2. VEP 녹음
- 동물을 마취하고 피부를 1.1 및 1.2.
로 준비합니다.
참고: 전기생리학적 기록에는 더 낮은 용량의 마취제를 사용할 수 있습니다(케타민 40mg/kg 및 메데토미딘 0.25mg/kg).
- 쥐를 어두운 방에 놓고 5-30 분 동안 어둠에 적응하도록하십시오. 어떤 경우에는 쥐가 스코토픽에 대해 어둡게 적응된 O/N이거나 포토픽 VEP 녹음에 대해 빛에 적응할 수 있습니다.
- 직장 온도계 프로브가 있는 동종 발열 담요 시스템으로 체온을 37 ± 0.5 °C로 유지합니다.
- 1.0% 트로피카마이드 점안액으로 동공을 확장시킵니다. 두개골 위의 피부를 열어 미리 배치된 현장 나사 전극에 접근합니다.
- 자극된 눈의 반대쪽 시각 피질 위에 나사를 연결하고 참조 나사를 증폭기에 연결합니다. 바늘 전극을 꼬리에 접지로 삽입합니다. 전극 임피던스를 측정하고 5kΩ 미만으로 유지하십시오.
- 미니 간즈펠트 자극기를 눈꺼풀 주변 피부에 직접 놓아 눈을 잘 격리할 수 있습니다. 자극기의 조명은 광도계에 의해 미리 보정되어야 합니다.
- 1Hz의 주파수에서 100회 플래시 플래시를 통해 광자 자극을 전달하며, 각각 1Hz와 100Hz의 저대역 통과 필터 설정을 제공합니다. 신호 샘플링 속도는 5kHz입니다.
참고: 신호는 각 주기 동안 두 개 이상의 샘플이 수집되도록 최소 약 250 - 300Hz에서 샘플링해야 합니다.
- 피부를 다시 봉합하고 동물을 보온 패드에 올려 마취에서 회복하도록 합니다. 일정 기간 동안 기능적 변화를 모니터링하기 위해 개별 동물에 대한 기록을 반복적으로 기록할 수 있습니다.