해면체 내 압력을 측정하기 위해 쥐에서 해면체 신경 자극 수행

초록

출처: Hox, M., et al. 쥐의 해면체 신경 자극 및 해면체 내 압력 기록. J. Vis. 특급 (2018).

이 비디오는 해면체 내 혈압 변화를 연구하기 위해 마취된 쥐의 해면체 신경의 격리와 자극을 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 수술을 위한 튜브, 전극 및 기구의 준비

1. 수술용 가위, 각진 미세 가위, 조직 집게, 한 쌍의 Dumont #7 및 #5 곡선 마이크로 집게, 마이크로 바늘 홀더 및 견인기를 사용하십시오.
   메모: 이것은 급성 절차이므로 기구를 멸균할 필요가 없습니다. 사용 후에는 70% 에탄올로 팁을 청소하고 닦으십시오.
2. 튜브를 70% 에탄올에 담근 다음 사용하기 전에 100U/mL 헤파린이 함유된 멸균 0.9% NaCl로 세척합니다. 시스템에 기포가 유입되지 않도록 튜브를 채워 두십시오.
3. 20-30cm의 폴리에틸렌(PE)-50 튜브 조각을 잘라 해면체 내 압력(ICP) 측정을 위한 카테터를 만듭니다. 압력을 줄이기 위해 튜브가 가능한 한 짧은지 확인하십시오.amp압력을 가합니다.
4. 바늘이 중간에서 부러질 때까지 멸균 24G 바늘을 좌우로 구부립니다. 음경 crus에 삽입하기 위해 베벨이 있는 조각을 PE 튜브의 말단 끝에 연결합니다. 압력 변환기에 연결하기 위해 나머지 절반을 허브에 삽입합니다. 시스템에 헤파린 식염수(100 U/mL)를 채웁니다.
5. 바이폴라 테프론 코팅 전극을 만들려면 두 개의 125μm 은선을 동일한 길이로 자릅니다. 테이프 조각을 사용하여 전선을 테이블 가장자리에 부착하고 함께 끼웁니다. 그런 다음 전극을 블랙 플레이트에 부착합니다.
6. 테프론을 작게 절개하고 #5 마이크로 집게를 사용하여 전극 끝에서 4-5mm 길이의 테프론 코팅을 벗겨냅니다. 메스로 끝을 잘라 균일한 길이를 얻고 메스 날의 뭉툭한 가장자리 주위의 끝을 구부려 고리를 만듭니다.
고리가 위쪽을 향하도록 끝
7. 이 검은색 플레이트의 가장자리 위로 약간 확장되도록 전극을 테이프로 감습니다. 플라스틱 플레이트에 실리콘 접착제를 10초 동안 혼합하고 후크에서 1-2mm 떨어진 전극 주위에 접착제 거품을 감습니다.
8. 사용하기 전에 약 5분 동안 건조시키십시오(그림 1). 자극기에 연결할 수 있도록 다른 쪽 끝의 더 긴 섹션에서 테프론을 벗겨냅니다.
   메모: 말단 끝의 후크를 다시 할 때 전극을 여러 번 재사용 할 수 있습니다.

2. 동물의 준비

1. 동물을 마취한 후 복부, 목, 회음부의 아래쪽 절반을 면도합니다. 70% 알코올로 동물을 문지른 다음 포비돈 요오드를 세 번 문지릅니다. 가열된 수술 패드에 쥐를 누운 자세로 놓습니다. 수의사 안연고를 바르고 마취를 2.5% 이소플루란과 0.8L/min 산소를 운반체로 하는 콧방울로 전환합니다.
   메모: 허용 가능한 마취 수준에 도달하기 위해 이소플루란과 산소의 수준을 조정합니다.

3. 수술 전 준비

1. 수술 현미경으로 전체 수술 절차를 수행하십시오: 3.15X에서 20X 범위의 배율로 충분합니다. 장갑을 착용하고 수술 내내 깨끗한 환경을 유지하십시오. 쥐를 커튼에 올려 놓습니다.

4. ICP 측정을 위한 Ischiocavernosus 근육 해부

1. 메스, 곧은 가위, Dumont #7 곡선형 마이크로 집게를 사용하여 음경 기저부 수준에서 시작하여 아래쪽으로 확장되는 정중선 옆으로 5cm 길이의 수직 피부 절개를 만듭니다(그림 2A). Q-tip을 사용하여 음낭 측면의 근막을 조심스럽게 분리합니다(그림 2B). 근막을 절개한 후 견인기를 부착하고 면봉 스왑으로 촉진하여 좌골 결절을 찾습니다(그림 2C).
2. ischiocavernosus 근육이 시각화될 때까지 이 지점의 지방 조직 내측을 통해 절개합니다(그림 3A). Dumont #7 곡선형 마이크로 집게를 사용하여 근육을 세로로 분리합니다. tunica albuginea는 밝은 흰색 구조로 나타납니다(그림 3B). 마이크로 집게와 마이크로 가위를 사용하여 튜니카 알부기네(tunica albuginea)를 적절하게 노출시켜 진행 상황을 확인합니다(그림 3C).
3. 시스템 설정을 보정한 후 회음부의 피부를 통해 튜브를 삽입하여 음경유낭과 평행하게 흐르도록 합니다(그림 4). 라인을 제자리에 두고 절개 부위를 식염수로 촉촉하게 유지하십시오.

5. 자극을 위한 CN 해부

1. 먼저 메스를 사용하여 피부를 통해 2cm 아래의 복부 정중선을 절개한 다음 곧은 가위와 마이크로 집게를 사용합니다. 알바 선과 그 아래 근육 조직을 따라 근막을 통해 일치하는 절개를 만들어 방광과 전립선을 노출시킵니다.
2. 좋은 노출을 얻기 위해 견인기를 사용하십시오. 면봉을 사용하여 전립선과 지방 조직을 분리하여 전립선의 배외측에서 작동하는 주요 골반 신경절(MPG)과 해면신경(CN)을 명확하게 시각화합니다(그림 5).
3. MPG와 CN을 시각화한 후 각진 마이크로 가위로 MPG 원위 2-5mm 신경 위에 있는 근막을 조심스럽게 절개합니다(그림 6a). #5 마이크로 겸자를 사용하여 신경의 각 측면과 그 아래에 조직을 펴서 4mm 길이의 부분을 분리하고(그림 6b) 신경 아래에 9-0 봉합사를 밀어 넣습니다(그림 6c).
4. 봉합사의 도움으로 신경을 약간 들어 올리고(그림 7a) 신경 주위에 양극 전극의 고리를 쉽게 배치할 수 있습니다(그림 7b). 조수가 2액형 실리콘 접착제와 인슐린 바늘 끝을 5초 동안 혼합하도록 합니다. 신경을 말리고 갈고리와 신경 주변 부위에 접착제를 바릅니다(그림 7c, d). 접착제가 마를 수 있도록 약 1분 동안 전극을 약간 당겨 신경을 높게 유지합니다.
5. 전극이 당기거나 꼬이지 않도록 오른쪽에 있는 견인기를 제외한 견인기를 제거하십시오. 노출된 장기에 식염수를 적시고 절개 부위에 식염수에 적신 거즈를 놓습니다.

6. ICP 측정을 위한 해면체 캐뉼레이션

1. 견인기를 사용하여 tunica albuginea의 시각화를 복원합니다. 견인기를 ischiocavernosus 근육에 부착하면 crus가 왜곡될 수 있으므로 주의하십시오.
2. 바늘을 부착하고 튜빙을 튜니카 알부기니아에 넣기 전에 헤파린 식염수로 튜브를 세척합니다. 한 손(비지배적)에 Dumont #7 곡선형 마이크로 집게를 사용하여 tunica albuginea와 나머지 근육을 삽입 지점의 원위부에 잡고 tunica albuginea를 늘린 상태로 유지합니다. 주로 사용하는 다른 손으로 곧은 마이크로 집게로 바늘을 잡고 해면체 과정과 평행하게 삽입합니다(그림 8).
3. 바늘을 해면체 안으로 5-8mm 밀어 넣습니다. 튜브를 세척하고 크러스를 눌러 라인을 테스트합니다(그림 9). 누출이 없는지 확인하십시오. 실수로 라인을 당기는 것을 방지하기 위해 테이프로 튜브를 테이블에 고정하십시오. 견인기를 제거합니다.

7. CN의 자극

1. 기록 프로그램(예: Spike 2)을 실행할 때 해면체 내 및 평균 동맥압을 지속적으로 기록합니다.
2. CN 자극을 위해 자극기(예: SD9 Grass Instruments, 재료 표 참조)에서 전류를 1.5mA, 주파수를 16Hz, 전압 3V, 펄스 폭을 5ms로 설정합니다. 자극 사이에 최소 50분의 휴식을 취하고 1초의 자극을 가합니다.
   메모: 첫 번째 자극은 일반적으로 반응 감소를 초래합니다(그림 10).

결과

그림 1. 바이폴라 테프론 코팅은 전극. (A) 코팅된 전극과 코팅되지 않은 전극 사이의 전이 영역에서 접착제 기포. (B) 전극의 원위 2cm가 단단히 납땜되어 있습니다. (C) 1mm 떨어진 평행 코팅되지 않은 후크.

그림 2. 동굴 같은 몸의 해부 - 랜드 마크. (A) 1cm 수직 피부 절개, 음경 기저부에서 2mm 측면에서 아래쪽으로 시작합니다. (B) 목화 면봉을 사용하여 분리된 음낭 측면의 근막. (C) 견인기 배치 후 작업 영역의 모습(pm: py...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
애드슨 겸자	정밀한 과학 도구	11006-12
Dumont #7 겸자	정밀한 과학 도구	11271-30
Dumont #5 겸자	정밀한 과학 도구	11273-20
ToughCut Mayo 가위	정밀한 과학 도구	14110-15
미니어처 Vannas 봄 가위	정밀한 과학 도구	15006-09
울트라 파인 지혈제	정밀한 과학 도구	13020-12
크릴 헤모스타트	정밀한 과학 도구	13004-14
Kwik-Sil 접착제	세계적인 정밀 기기	퀵실
테프론 코팅 은선 0.125mm	세계적인 정밀 기기	AGT0510
탄성 와이어 견인기	맞춤 제작
메스 칼날	정밀한 과학 도구	10023-00
PE-50 튜빙	워너 인스트루먼트	Tel.: 64-0753
23 G 바늘	크루제	121272
SD-9 스퀘어 펄스 자극기	소마트코	1077년/183
혈압 변환기 및 케이블	세계적인 정밀 기기	BLPR2
Raucotupf 코튼 팁 애플리케이터	로만-라우허	11966년
Pro-ophta 안구 스틱	로만-라우허	16515
염화나트륨 0,9 % 100 mL	지역 약국
덤플링을	지역 약국
25mL 주사기	오덴세 대학 병원
수의사 안연 - Viscotears	지역 약국
은선	Science Products GmbH, 하이델베르크, 독일
실리콘 접착제	Kwik-Sil, World Precision Instruments, 미국 플로리다주 새러소타

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