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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. 통합 마이크로 드라이브 어레이 준비
- 다른 곳에서 설명한 대로 대뇌피질 LFP(Local Field Potential) 기록을 위한 마이크로 드라이브 어레이를 생성합니다. 1.2에 설명된 대로 bioflex 와이어에 연결된 심전도/근전도/호흡수(ECG/EMG/BR) 채널로 사용하기 위해 전극 인터페이스 보드(EIB)에 최소 6개의 금속 구멍을 열어 두십시오.
- bioflex 와이어를 5.0cm 길이의 6개 조각으로 자릅니다. 길이가 ~5.0mm인 모든 와이어 조각의 양쪽 끝의 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 코팅을 벗겨냅니다. 각 와이어 조각의 한쪽 끝을 금핀으로 EIB의 열린 금속 구멍(ECG/EMG/BR 채널) 중 하나에 연결합니다.
- 에나멜 와이어를 5.0cm 두 조각으로 자릅니다. 이러한 각 와이어의 한쪽 끝을 EIB의 접지/참조(g/r) 채널에 납땜합니다(그림 1).
- ECG 전극을 준비하기 위해 bioflex 와이어를 16cm 두 조각으로 자릅니다. 이 와이어 조각 끝의 PTFE 코팅을 한쪽 끝(짧은 끝)이 ~5.0mm, 다른 쪽 끝(긴 끝)이 ~15mm 길이로 벗겨냅니다.
- 와이어의 긴 끝을 구부려 납땜으로 링의 모양을 고정하여 직경 2.0mm의 와이어 링을 형성합니다.
- EMG 전극을 준비하기 위해 bioflex 와이어를 8cm 길이의 2개 조각으로 자릅니다. 길이가 ~5.0mm인 이 와이어 조각의 양쪽 끝에서 PTFE 코팅을 벗겨냅니다.
- BR 전극을 준비하기 위해 bioflex 와이어를 6.0cm 길이의 2 조각으로 자릅니다. 길이가 ~ 5.0mm 인 이 와이어 조각의 양쪽 끝의 에나멜 코팅을 벗겨냅니다. 이 와이어 조각의 각 한쪽 끝을 스테인리스 스틸 나사(스템 직경: 1.0mm, 줄기 길이 : 4.0 mm).
- 접지/참조(gr) 전극을 준비하기 위해 에나멜 와이어를 6.0cm 길이의 2조각으로 자릅니다. 이 와이어 조각의 양쪽 끝의 에나멜 코팅을 ~5.0mm 길이로 벗겨냅니다. 이 와이어 조각의 각 한쪽 끝을 스테인리스 스틸 나사(스템 직경: 1.4mm, 줄기 길이: 3.0mm).
- 가스는 모든 전극과 스테인리스 나사를 살균하여 깨끗한 공간에 보관합니다.
2. Integrative Micro-Drive Array 및 BR 전극 이식
- 입체 장치에 쥐를 고정하십시오. 눈 사이 지점에서 목 부위까지 정중선을 따라 머리를 ~3.0cm 절개합니다. 두개골을 노출시킵니다.
- 후각구 위 직경 0.7-1.0mm, 전방 11.0mm, 양측 1mm를 고속 드릴로 브레그마에서 두 개의 원형 개두술을 만듭니다. 나사 줄기의 끝이 뇌 표면에 부착될 때까지 두개골에 두 개의 BR 전극을 이식합니다.
- 전두엽 피질 위 0.7-1.0mm, 전방으로 2.7mm, 브레그마에서 양측으로 2.7mm의 직경을 가진 두 개의 원형 개두술을 만듭니다. 나사 줄기의 끝이 뇌 표면에 부착될 때까지 두개골에 두 개의 g/r 전극을 이식합니다.
- 큰 개두술을 둘러싼 영역에 직경 1.0mm의 구멍을 6-8개 만듭니다. 두개골에 앵커 나사(줄기 직경: 1.4mm, 줄기 길이: 3.0mm)를 삽입합니다.
- 해마 위 직경 ~2.0mm, 후방 3.8mm, 브레그마에서 양측 2.5mm의 직경을 가진 큰 원형 개두술을 만듭니다. 드라이브 어레이의 캐뉼러 팁이 대형 개두술 위에 위치하도록 통합 마이크로 드라이브 어레이를 배치합니다.
- 캐뉼라 팁과 뇌 표면 사이의 틈 공간을 ~100μL의 두 가지 용액, 즉 0.5%(질량 기준) 알긴산 나트륨과 10%(질량 기준) 염화칼슘으로 채웁니다.
메모: 이 과정은 두 용액이 두개골에 혼합된 후 ~5분 안에 투명한 겔을 형성합니다.
- 캐뉼러, BR 전극, g/r 전극 및 앵커 나사를 0.5cm 두께의 치과용 시멘트로 덮습니다.이 단계에서 BR 및 g/r 전극의 열린 끝을 시멘트로 덮지 않도록 주의하십시오.
- ECG, EMG, BR 및 g/r 전극의 열린 끝을 이전에 EIB에 연결된 개별 와이어 팁에 납땜합니다(1.2 및 1.3 단계 참조).
- 통합 마이크로 드라이브 어레이의 바닥 부분과 모든 전극 와이어를 치과용 시멘트로 덮습니다. 이식 후 쥐가 전극을 긁을 수 없도록 모든 전극 와이어가 완전히 덮여 있는지 확인하십시오.
- 흉골 누운 자세를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복한 후, 동물을 투명한 플렉시글라스 가정용 우리로 되돌려 놓고 물과 음식을 자유롭게 이용할 수 있도록 혼자 있게 합니다. 수술 후에는 항생제(겐타마이신)를 투여한다.
3. 생체 내 녹음
참고: 모든 신호는 단위 활동(30kHz에서 샘플링되고 대역 통과 필터링(500 - 6kHz))을 제외하고 증폭, 2kHz에서 샘플링 및 대역 통과 필터링(0.1 - 500Hz)됩니다.
- 통합 마이크로 드라이브 어레이의 EIB를 헤드 스테이지에 연결tage 녹음 장치의.
- 수술 후 몇 주 동안 나사를 돌려 사분체를 진행하십시오. 일단 사극체가 표적 뇌 영역에 인접하게 되면, 안정적인 기록을 위해 며칠에 걸쳐 사분체를 해당 영역에 정착시킨다.
- 동물이 녹음실에서 자유롭게 움직이는 동안 전기 신호를 모니터링합니다.
