새끼 쥐의 청각 뇌간 반응 기록

초록

출처: Chang, A. et al., 출생 후 쥐의 청각 뇌간 반응 및 외부 유모 세포 전체 세포 패치 클램프 기록. J. Vis. 특급 (2018).

이 비디오는 새끼 쥐의 청각 뇌간 반응(ABR)을 기록하는 방법을 보여줍니다. 신경 반응을 평가하기 위해 전극 배치, 소리 자극 적용 및 뇌간의 신호 처리 분석 단계를 간략하게 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 청각 뇌간 반응(ABR) 기록

1. 1.5% 펜토바르비탈 나트륨(새끼의 경우 22mg/kg, 성인의 경우 30mg/kg, 복강내(ip))의 단일 주사로 Sprague Dawley(SD) 쥐(1-14일 된 새끼 및 2개월 된 성인, 남녀 모두)를 마취합니다.
2. 마취된 동물을 폴리에틸렌 폼 틀에 넣어 동물의 몸을 움직이지 못하게 합니다. 소음 감쇠실의 진동 방지 테이블에 동물을 놓습니다. 발열 패드로 동물의 체온을 37.5 °C로 유지하십시오.
3. 70%(vol/vol) 에탄올로 머리 부분을 닦습니다. 가는 가위를 사용하여 외부 귓바퀴까지 1-2mm 절개를 복측으로 만들어 기준 전극 또는 접지를 배치합니다. 피하 바늘 전극(기록 전극)은 두개골 꼭짓점 위에 위치합니다(그림 1A).
4. 함수 발생기를 사용하여 다양한 주파수(2, 4, 8, 16, 24 및 32kHz) 및 강도(5dB 단계에서 85dB에서 10dB SPL로 감소)의 보정된 톤 버스트(1ms 상승/하강, 3ms 안정)를 생성합니다. 주파수와 진폭을 수동으로 또는 컴퓨터를 사용하여 변경합니다. 동물의 머리 쪽으로 10cm 떨어진 곳에 있는 정전기 스피커를 통해 소리 자극을 전달합니다.
5. ABR을 얻기 위해 다기능 프로세서를 사용하여 사운드가 유도한 전위를 필터링(100-1,000Hz), 증폭 및 평균화(256배)합니다. ABR 추적은 온라인으로 모니터링되고 오프라인 분석을 위해 저장됩니다. 한 동물의 ABR 녹음을 완료하는 데 약 40분이 걸립니다.
   메모: 일반적으로 대기 시간이 15ms 미만인 3-7개의 피크(파동 I에서 파동 VII)를 식별할 수 있습니다(그림 1B). ABR 임계값은 파동 I 및 II를 감지할 수 있는 최소 소음 수준으로 정의됩니다.
6. 동물이 마취에서 깨어나기 전에 안락사시킵니다(0.3mL, 1.5% 펜토바르비탈 나트륨의 복강 내 주사).

결과

그림 1. 청각 뇌간 반응 기록. (A) 녹음전극을 양쪽 귀 사이의 두피에 삽입하였다. 접지 전극과 기준 전극은 각각 왼쪽과 오른쪽 귓바퀴 아래에 배치되었습니다. 개방형 스피커는 쥐의 코 끝에서 10cm 떨어진 곳에 배치되었습니다. (B) 16kHz, 80dB SPL 톤 버스트에 응답하는 두 개의 대표적인 ABR 파형. P8 새끼에서 기록된 상위 추적. 성체 쥐에서 기록된 하단 흔적. 숫자는 파형의 서로 다른 피크를 나타냅니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
펜토바르비탈 나트륨	시그마	P3761	물 1.5%
SD 쥐	남부 의과대학 실험동물센터
ES1 스피커	터커-데이비스 테크놀로지스
TDT 시스템 3	터커-데이비스 테크놀로지스
SigGenRP 소프트웨어	터커-데이비스 테크놀로지스
BioSigRP 소프트웨어	터커-데이비스 테크놀로지스
제이클램프	과학적 솔루션
저잡음 데이터 수집 시스템	축 삭	1440ᅡ

(영문)