방법 논문

전기생리학적 기록을 사용한 공동 배양에서의 신경 연결 형성 평가

2025년 7월 8일

이 논문에서

초록

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출처: Su, C. T. E., et al. 공동 배양 시스템에서 신경 세포 연결의 형성을 평가하기 위한 광유전학적 접근 방식. J. Vis. 특급 (2015년)

이 비디오는 iPSC 유래 뉴런과 쥐 피질 뉴런 사이의 신경 연결을 평가하기 위한 전기생리학적 기록을 보여주고, 빛에 민감한 이온 채널을 활성화하고 시냅스후 전류를 감지하여 공동 배양에서 시냅스 접촉을 확인합니다.

프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. iPSC 유래 뉴런의 전기생리학적 기록

  1. 인간 iPSC가 성숙한 뉴런처럼 행동하는지 확인합니다.
    1. 60X(0.9 NA) 수침 렌즈가 장착된 정립 컨포칼 현미경을 사용하여 tdTomato를 시각화하여 인간 iPSC와 차별화된 세포를 찾을 수 있습니다.
    2. 기록 피펫을 4-6M의 저항으로 당깁니다.95% O2/ 5% CO2로 일정하게 기포된 외부 용액의 실온에서 관류 셀을 관류합니다. 기록 마이크로피펫에 내부 용액을 채웁니다.
    3. 전체 셀 모드에서 tdTomato+ 셀을 패치하고 전류 클램프에서 전류 주입(1초 지속, 10pA 증분)에 대한 반응으로 활동전위 발화를 기록합니다.
  2. ChR2를 발현하는 피질 세포의 활동 전위가 광 자극에 의해 안정적으로 유발되는지 확인합니다.
    1. 컨포칼 현미경에서 GFP를 시각화하여 ChR2를 발현하는 피질 세포를 찾습니다. 1.1.2 - 1.1.3 단계에 따라 피질 세포에 대한 전체 세포 패치 클램프 기록을 수행합니다.
    2. 수은 아크 램프(100W)를 사용한 조명 조명에 의해 활동 전위가 안정적으로 유발되는지 확인하십시오. 여기 필터의 파장은 480/40nm입니다.
  3. 광유전학적 자극을 수행합니다.
    1. 전체 셀 모드에서 tdTomato+ 셀을 패치하고 볼륨을 설정합니다.tage clamp -70mV에서. 2kHz에서 전류 신호를 필터링하고 10kHz에서 디지털화합니다. 기록 중 일관성을 위해 10에서 20M 범위의 직렬 저항을 모니터링합니다.
    2. 100W 수은 램프와 480/40nm 여기 필터로 30초 동안 전체 필드를 자극합니다.
    3. ChR2 발현 시냅스전 피질 뉴런의 광자극에 의해 유도된 패치된 세포의 시냅스후 전류(PSC)를 기록합니다. PSC를 검출하고 측정합니다.

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공개 사항

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
염화나트륨시그마S7653
케이클시그마P5405
나HCO3시그마S5761
나H2PO4플루카71505
재질 보기 MgCl2시그마M8266
염화칼슘2시그마C1016
D(+)-포도당시그마G7520전기생리학 연구용
K-글루코네이트시그마P1847
코KANTO 화학3234400
헤페스시그마H3375 (영문전기생리학 연구용
에그타시그마E3889
Na2ATP시그마A7699
나3GTP시그마G8877
붕규산 유리 모세관세계 정밀 기기, Inc1604323
수은 쇼트 아크 램프오스람HBO 103 승/2
(영문) (영문) )

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태그

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