쥐의 망막 색소 상피에 대한 직접 결합 망막 전기도 기록

초록

출처: Miyagishima, K. J., et al. 마우스 망막 색소 상피의 광 유발 전기 반응을 기록하기 위한 직접 결합 망막전도(DC-ERG). J. Vis. 특급 (2020).

이 비디오는 어둡게 적응된 마취된 마우스 망막 색소 상피(RPE)에 직접 결합 망막 전위전도(DC-ERG)를 기록하는 방법을 보여줍니다. 확장 점안액을 적용한 후, 동물을 기록 장치에 넣고 염 완충액으로 채워진 모세관 전극을 각막에 놓습니다. 기준선을 설정한 후 DC-ERG가 기록됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마우스 및 전극 위치 지정

1. 어두운 적응을 위해 통풍이 잘되고 빛이 잘 통하지 않는 상자에 쥐를 밤새 보관하십시오.
2. 동물은 케타민(80mg/kg)과 자일라진(8mg/kg)의 복강내 주사로 마취되었습니다.
3. 각막을 마취하기 위해 0.5% 프로파라카인 HCl을 국소적으로 한 방울 바르고, 동공을 확장하기 위해 2.5% 페닐에프린 HCl과 0.5% 트로피카마이드를 한 방울 떨어뜨립니다.
4. 기록 중에 부주의한 경련이 유리 모세관 전극을 방해하지 않도록 가위로 마우스 수염을 다듬습니다.
   메모: ERG 시스템 내의 DC-ERG(Direct-Coupled Electroretinogram) 자극 프로토콜에는 단계(앞으로 화살표) 또는 단계(뒤로 화살표)를 클릭하여 선택할 수 있는 몇 가지 내장 자극 루틴이 있습니다. 소프트웨어의 1, 4, 5단계만 DC-ERG 녹음을 준비하고 수행하는 데 필요합니다.
5. ERG 시스템에서 소프트웨어는 올바른 환자가 선택되었는지 확인합니다. 녹색 프로토콜 버튼을 클릭합니다. 프로토콜 설명에서 DC-ERG를 선택합니다. 그런 다음 실행을 클릭합니다. 예를 클릭하여 이 테스트가 올바른 테스트인지 확인합니다.
6. 1/6단계로 지정된 적색광 자극을 사용하여 돔 내부의 적색광을 켜서 임피던스의 변화를 관찰하면서 마우스와 전극의 위치를
파악합니다.
7. 가열된 녹음 테이블에 마우스를 놓고 집게를 사용하여 뒷다리 피부를 조심스럽게 텐트합니다. 한 손으로 바늘 전극을 단단히 잡고 뒷다리에 피하로 삽입하여 제자리에 고정합니다.
8. 참조 Silver/Siverchloride(Ag/AgCl) 전극(Table of Materials)을 입 안에 넣어 소결된 펠릿이 뒤쪽 뺨을 따라 놓이고 치아 뒤에 고정되도록 합니다.
   메모: 금선 전극은 임피던스 특성이 다르고 피크 대 피크 잡음을 증가시키므로 입 참조 전극으로 사용해서는 안 됩니다.
9. 모세관 전극을 마우스의 눈에 놓기 전에 유리 모세관이 있는 전극 홀더를 수직으로 잡고 검지 손가락으로 전극 홀더를 튕겨 발생했을 수 있는 기포를 제거합니다. 주사기에 부착된 25G 바늘을 사용하여 팁에 HBSS(Balanced Salt Solution)를 채우고 팁에 기포가 갇혀 있지 않은지 확인합니다. HBSS로 채워진 모세혈관의 열린 끝이 각막과 부드럽게 접촉하도록 전극 홀더 스탠드를 배치합니다.
10. 기포가 유입되지 않도록 윤활제 아이 젤 디스펜서를 거꾸로 잡고 초기 방울을 버리는 등 특별한 예방 조치를 취하십시오. 윤활제 아이 젤 한 방울을 각 눈에 떨어뜨려 전도성을 유지하고 기록 중 건조를 방지합니다.

2. DC-ERG 레코딩

1. 단계(앞으로 화살표)를 클릭하여 4/6단계 "Long Flash No-Li"를 선택합니다.
2. 임피던스를 클릭합니다. 임피던스 검사 화면을 사용하여 왼쪽 눈과 오른쪽 눈의 저항을 검사합니다. 각 눈의 기록 전극에 대한 임피던스 값은 유사할 것으로 예상됩니다(~39kΩ). 접지 및 기준 전극의 임피던스 값은 10kΩ 미만일 것으로 예상됩니다.
3. Preview(미리보기)를 클릭하여 왼쪽 및 오른쪽 눈의 흔적을 확인합니다. 안정적인 기준선에 도달할 때까지 기다립니다(<10분). 중지를 클릭하여 추적 미리보기를 종료합니다.
   메모: 드리프트 방향의 급격한 변화나 녹음의 비정상적인 노이즈는 시간이 지나도 개선되지 않으며 주의가 필요한 모세관 전극을 식별해야 합니다. 가장 가능성이 높은 원인은 전극 끝에 기포가 유입되는 것입니다. 팁을 HBSS로 다시 채웁니다. Preview(미리보기)를 다시 클릭하여 기준선을 확인합니다.
4. 단계(앞으로 화살표)를 클릭하여 5/6단계 "Long Flash 10 cd 7 min"을 선택합니다. 실행을 클릭하여 녹음을 시작합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Ag/AgCl(입) 전극	WPI 주식회사	제1	마우스용 입 참조 전극
세라믹 타일	셔터 계기	증권 시세	유리 모세관 튜브를 적절한 크기로 절단하는 데 사용됩니다.
코튼 팁 클리닝 스틱	청교도 의료 제품	867-WC 접착제 없음	전극 홀더 어셈블리의 적합성을 개선하기 위해 스페이서로 사용됩니다.
망막전도(ERG) 시스템	다이아그노시스 LLC	E3 시스템	시력 연구 및 약물 시험에서 안과 상태를 진단하기 위한 시각 전기 생리학 시스템
분젠 버너	아르고스 테크놀로지스	BW20002460	또는 화염의 밑에 유리를 형성하기 위하여 동등하다
유리 모세관 (1.5mm)	셔터 기기	BF150-75	HBSS를 채우고 각막에 접촉하기 위해
행크의 완충염 용액(HBSS)	써모 피셔 사이언티픽 Inc	제14175-095	상용. RT에서 유지 관리
인라인 필터	왓맨	6722-5001	에어로졸로부터 진공 펌프를 보호하기 위해
미세 전극 홀더를 위한 저잡음 케이블	WPI 주식회사	5372	케이블과 전극 홀더 어셈블리의 길이와 배치를 개선하기 위해 제안
마그네틱 볼 조인트	WPI 주식회사	500871	전극 홀더 어셈블리를 스테이지에 자기적으로 배치하기 위해
매트랩	매스웍스		MatLab: 해석 소프트웨어 편집용
Matlab Curvefit 툴박스	매스웍스		Toolbox for MatLab(해석 소프트웨어 편집에만 필요)
MatLab 컴파일러	매스웍스		Toolbox for MatLab(해석 소프트웨어를 편집하고 다시 릴리스하는 데만 필요)
MatLab Runtime 버전 9.5	매스웍스	R2018b(9.5)	해석 소프트웨어 실행에 필요: https://www.mathworks.com/products/compiler/matlab-runtime.html
미세 전극 홀더(45도)	WPI 주식회사	메H345-15	모세혈관을 고정하기 위해
바늘 (25 ga)	코비디엔	8881250313	모세관 튜브에 HBSS를 채우기 위해
바늘(접지) 전극	리듬링크	13mm - elctrode 1개	마우스용 피하 바늘 전극(접지)(길이 13mm, 바늘 직경 0.4mm, 도선 1.5m)
레귤레이터/파워 컨디셔너	퍼먼	P-1800	또는 전력선을 통해 유입되는 노이즈에서 DC 오프셋을 제거하는 것과 동일
주사기(12mL)	모노 젝트	1181200777	모세관 튜브에 HBSS를 채우기 위해
T-클립	콜-파머	제06852-20	전극 홀더 어셈블리용
진공 데시케이터	벨 아트	420120000	투명 폴리카보네이트 바닥 & 커버
약리학적 치료
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자일라진	아나세드	sc-362949Rx	진통제와 근육 이완제
제타민(케타민 HCl)	베트원	501072	근육 주사를 위한 마취제

화 표시기 (영어) 호 의 됨 호 호 호 호