청각신경근 자극 및 시냅스후 전류 기록(Auditory Nerve Root Stimulation and Postsynaptic Current Recordings in a Mouse Brain Wedge Slice)

Abstract

출처: Fischl, M. J., et al. 생체 내 신경 회로 연결을 모방하기 위한 시험관 내 쐐기 슬라이스 준비. J. Vis. 특급.(2020년)

이 비디오는 청각 신경근을 자극하고 마우스 뇌 쐐기 슬라이스의 내측 올리보코클리 뉴런에서 시냅스후 전류를 기록하는 프로토콜을 보여줍니다.

Protocol

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토 위원회에 의해 검토되고 승인되었습니다.

1. 전기생리학 설정 및 기록

1. 쐐기 슬라이스를 녹음 챔버에 놓고 하프 또는 안정화 시스템으로 슬라이스를 고정합니다. 발암물질로 거품을 일으킨 따뜻한(35°C) ACSF를 사용하여 7-10mL/분의 속도로 조직을 지속적으로 관류합니다.
2. 패치 클램프 기록을 위해 561nm 방출 필터와 함께 에피 형광을 사용하여 사다리꼴체 VNTB의 복부 핵에서 유전적으로 표지된 내측 올리보코클리어 MOC 뉴런을 식별합니다. 잠재적으로 패치할 수 있는 셀이 없는 경우 슬라이스를 대칭 이동합니다.
3. DIC 광학 장치를 사용하여 슬라이스의 두꺼운 면에 있는 청각 신경근에 초점을 맞추고 미세 조작기를 사용하여 양극성 텅스텐 자극 전극을 청각 신경근으로 부드럽게 이동하여 조직 표면으로 부드럽게 이동합니다.
   메모: 흡입 전극은 다른 실험실의 청각 신경 자극 실험에 사용되었습니다. 세타 유리 전극 또는 광 자극 방법은 다른 특정 제제에 적용 가능한 경우 사용할 수 있습니다.
4. 시야를 다시 VNTB로 이동하여 패치 클램프 전기생리학의 표적이 ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
A1R 정립 컨포칼 현미경	Nikon 악기		전기생리학 및 이미징 현미경은 전기생리학과 호환되는 모든 현미경이 될 수 있습니다
전극 붕규산 유리 w/ 필라멘트 OD 1.5mm, ID 1.1mm, 길이 10cm	셔터 계기	BF150-110-10	패치 클램핑 피펫 유리
전극 필러 MicroFil	WPI (영어)	씨엠프20G	패치 전극 피펫 필러
인라인 용액 히터	워너 인스트루먼트 (GSAdvantage)	SH-27B	슬라이스 관류 시스템 히터
Multi-Micromanipulator 시스템	셔터 인트루먼트	MPC-200(MP285 포함	패치 클램프 및 자극 전극 배치를 위한 Micromanipulators
P-1000 유리 마이크로피펫용 수평 피펫 풀러	셔터 기기	FG-P1000	패치 클램프 피펫터 풀러
패치 클램프 증폭기 및 소프트웨어	헤카	EPC-10 / 패치마스터 다음	모든 증폭기/소프트웨어가 될 수 있습니다
레코딩 챔버	워너 인스트루먼트	RC26G	녹음 중 "bath" 슬라이스
레코딩 챔버 하프	워너 인스트루먼트	640253	전기생리학 기록 중 슬라이스 안정화
Slice 배양 챔버	커스텀 빌드		슬라이스 후 회수하는 동안 슬라이스를 위한 가열되고 산소가 공급된 보관 챔버
자극 격리 장치	A.M.P.I.	아이소-플렉스	전기생리학을 위한 자극 격리 장치
주사기 60CC	Fischer Scientific (인트라몰)	Tel.: 14-820-11	전기생리학: 관류액 취급
온도 조절기	워너 인스트루먼트 (GSAdvantage)	TC-324C	Slice 관류 시스템 온도 컨트롤러
튜빙 1/8 OD 1/16 ID	Fischer Scientific (인트라몰)	제14-171-129	전기생리학: 관류액 취급
Tugsten 동심 양극 미세 전극	WPI (영어)	TM33CCINS	전기생리학을 위한 자극 전극