Drosophila의 감각 뉴런에서 생리적 반응 감지

초록

출처: Shankar, S., et al. 라이브 칼슘 이미징을 사용하여 지질 페로몬에 대한 초파리 감각 뉴런의 생리적 반응을 측정합니다. J. Vis. 특급 (2016).

이 비디오는 리간드 결합 및 형광 이미징을 사용하여 초파리에서 감각 뉴런 반응을 감지하는 방법을 보여줍니다. 리간드는 뉴런 수용체에 결합하여 칼슘 유입을 일으킵니다. 칼슘은 지표 복합체에 결합하여 형광 방출을 유발하여 리간드에 대한 신경 반응을 확인합니다.

프로토콜

1. 샘플 준비

1. Gal4 드라이버 라인을 UAS-GCaMP5G 초파리 멜라노가스터 파리(w; P{20XUAS-IVS-GCaMP5G}attP40)을 참조하십시오. 십자가가 25 ° C에서 자라도록하십시오 .
   메모: Gal4 또는 UAS-GCaMP 전이유전자의 여러 사본으로 파리를 생성하면 형광 신호 강도를 향상시키는 데 도움이 될 수 있습니다. UAS-GCaMP 전이유전자(UAS-GCaMP3)의 이전 버전은 Gr68a-Gal4 드라이버의 제어 하에 발현될 때 매우 약한 형광 강도를 보였습니다.
   1. 새로 폐쇄된 성충 파리를 수집하고 성별로 분리하여 25°C에서 기릅니다.
      참고: GCaMP5G 형광의 기준선 수준은 14일에서 28일 사이의 파리에서 최적입니다. 파리를 성별로 분리하는 것은 신경 반응에 영향을 미칠 수 있는 사회적 상호 작용의 가능성을 배제합니다.
2. CO₂의 온화한 흐름에서 파리를 마취합니다.
3. 먼저 0.17mm 커버슬립 중....

결과

그림 1: 앞다리 또는 뉴런의 이미징을 위한 살아있는 플라이 장착. (A) 앞다리 장착: 살아있는 수컷 파리의 3.2X 이미지로, 테이프로 커버슬립에 고정된 앞다리를 보여줍니다. (B) 파리의 40X 이미지는 각각의 족근 분절(T1-5)과 제1 족근 분절 위와 다섯 번째 족근 분절에 테이프가 배치된 것을 보여줍니다. (C) 장착: 끝을 노출시키기 위해 연단 위에 테이프 조각을 놓습니다. (D) 자극 추가를 위한 피펫 팁은 플라이보다 약간 위에 있으며 제제와 직접 접촉하지 않습니다.

표 1: 다양한 용매에서 CH₅0₃의 용해도. DMSO: 디메틸 설폭사이드. 에탄올, 헥산 및 DMSO 용액을 dH2O(v.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Gr68A-갈4			H. Amrein(미국 텍사스 A&M 건강 과학 센터)과 J. Carlson(미국 코네티컷주 예일 대학교)의 선물
ppk23-갈4			K. Scott의 선물 (Univ. of California, Berkeley, CA, USA)
UAS-GCaMP5		42037	블루밍턴 초파리 주식 센터
0.17mm 커버슬립(Gold-Seal 커버슬립)	전자 현미경 서비스	63790-10
매니큐어, "Hard as Nails Clear"	샐리 한센
PAP 펜	시그마-알드리치	Z377821
페인트 브러시			끝이 가는 브러시
테이프	스카치 브랜드
트리톤 X-100	시그마-알드리치	13021
에탄올, 실험실 등급	머 크	10094
헥산, HPLC 등급	시그마-알드리치	H303SK-4
디엠소	시그마-알드리치	472301
PBST (영문)			프로토콜 섹션에 설명된 레시피
채널503			Mori et al., 2010에 기술된 합성
sCMOS 카메라(ORCA 플래시 4.0)	하마마쓰	C11578-22U
현미경 (Ti-Eclipse)	니콘	니켈 - E
회전하는 디스크 스캔 헤드	요코가와	CSU-X1-A1

년 년 년