다전극 배열을 사용한 병아리 배아 신경망 발달에 대한 독소의 영향 평가

초록

출처: Sanchez, K. R., et.al. 다중 전극 배열을 사용하여 척추 신경 네트워크 기능 개발에 대한 내분비 교란 화합물의 효과 평가. J. Vis. 특급 (2018).

이 비디오는 다중 전극 어레이(MEA)를 사용하여 초기 배아 병아리 신경 세포 배양에 대한 독소의 영향을 연구하는 방법을 보여줍니다. MEA는 뉴런 네트워크에서 뉴런의 동기 활동을 모니터링함으로써 독소 노출에 대한 반응으로 뉴런 네트워크의 기능적 역학을 캡처합니다. 독소 노출 시 동기화율 감소와 발화율이 감소하는 것은 신경 네트워크 성숙과 기능에 해로운 영향을 미친다는 점을 강조합니다.

프로토콜

1. 뉴런 네트워크 활동 기록

1. 획득 당일, 배양 배지를 새로운 neurobasal 배지로 교환하고 기록하기 전에 최소 2시간 동안 MEA를 CO₂ 인큐베이터에 반환합니다. 기록 소프트웨어를 시작하고 온도 아이콘을 클릭하여 MEA의 온도를 37°C로 설정합니다.
   메모: 기록은 도금 3일차부터 시작할 수 있으며 배양이 살아 있는 한 계속될 수 있습니다.
2. "Muse" 아이콘(왼쪽 창 패널의 스트림 아래)을 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 "Add Processing" 및 "Spike Detector"를 선택한 다음 팝업 창에서 OK를 클릭하여 획득 매개변수를 설정합니다."Spike Detector (6 x STD)"가 파일 이름 아래에 나타납니다.
3. 그런 다음 스파이크 감지기를 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 "처리 추가" 및 "버스트 감지기"를 선택한 다음 팝업 창에서 확인을 클릭합니다. "버스트 감지기"(ISI)가 Muse 아이콘 아래에 나타납니다.
4. 그런 다음 Burst Detector를 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 "Add Processing" 및 "Neural Statistics Compiler"를 선택합니다.팝업 창에서 File Header, Aggregated Well Statistics 및 Synchrony가 선택되어 있는지 확인합니다. 확인을 클릭합니다. 아래에 "Statistics Compiler"가 나타납니다.
   메모: 이렇게 하면 적응형 임계값 교차(6x STD 필터), 100ms의 스파이크 간 간격과 최소 스파이크 수가 5, 20ms의 동기화 매개변수로 10초의 평균 발사 속도 감지, 분당 0.083333 스파이크의 최소 스파이크 속도가 설정됩니다.
5. 하단의 시계 아이콘을 클릭하여 녹화 시간을 5분(300,000ms)으로 예약 녹화합니다. 이는 설정 섹션의 정보를 5.1분마다 기록하고 5분 동안 기록하도록 변경하여 달성됩니다. 이 작업은 즉시 시작되고 한 번 실행됩니다.
6. MEA를 이동하기 전에 MEA의 온도가 37°C에 도달했는지 확인하십시오. 인큐베이터에서 MEA를 제거하고 기록 장치에 놓고 MEA를 잠급니다. 예약 녹화 섹션에서 녹화 시작 또는 "파일 재생" 창에서 녹화 아이콘을 클릭하여 네트워크 활동 녹화를 시작합니다. 일반적으로 5분(300,000ms)의 기록 시간이면 충분하지만 최대 10분의 더 긴 기록을 얻을 수 있습니다.
7. 기록 후 MEA를 인큐베이터로 반환합니다.
   메모: 멸균 상태를 유지하고 MEA가 인큐베이터 외부에 있는 시간을 최소화하기 위해 주의를 기울여야 합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
액시온 뮤즈 MEA	액시온 바이오시스템즈	M64-GL1-30PT200	원고에서는 MEA 시스템으로 불릴 것입니다
Axis 소프트웨어	액시온 바이오시스템즈		원고에서는 녹음 소프트웨어라고 불립니다
BPA는	시그마-알드리치	239658-250지
이토(EtOH	시그마-알드리치	64-17-5
Neurobasal 배지	브레인비츠	NB4-500
Neuroexplorer 통계 소프트웨어	넥스 테크놀로지스	뉴로익스플로러 버전 5