신생아 마우스 뇌에서 쥐 사이토메갈로바이러스 분포를 분석하기 위한 뇌실 내 주사

초록

출처: Kawasaki, H., et al. 신생아 뇌에 바이러스 입자 및 형광 마이크로비즈의 뇌 내실 및 혈관 내 주입. J. Vis. 특급 (2016).

이 비디오는 신생아 마우스 뇌에서 쥐 거대세포바이러스(MCMV) 분포를 연구하기 위한 뇌내폐 주사 과정을 보여줍니다. 가시성을 위해 강화된 녹색 형광 단백질(EGFP)을 발현하도록 설계된 MCMV는 새끼 쥐의 뇌 외측심실에 주입됩니다. 주입된 바이러스는 뇌척수액을 통해 순환하여 가장자리 영역, 맥락막 신경총 및 심실하 영역을 포함한 뇌실 주위 영역의 세포를 감염시킵니다.

프로토콜

1. 신생아 마우스에 MCMV 및 형광 마이크로비즈의 ICV 주입

1. 정상적인 임신한 ICR 마우스를 12시간의 라이트/다크 주기 하에 온도 조절 시설에서 유지합니다. 신생아는 출생 당일에 P 0.5로 지정됩니다.
2. 10μl 주사기와 27g 바늘에 70% 알코올을 함유하여 소독합니다.
3. MCMV 또는 형광 마이크로비즈가 포함된 주사 용액(5μl)을 주사기의 플런저를 조심스럽게 당겨 바늘에 넣습니다.
4. 신생아 마우스(P 0.5)를 3-4분 동안 얼음 위에 올려 놓아 제지합니다. 동물이 마취되면 발가락 꼬집음 반응 방법을 사용하여 마취 깊이를 결정합니다.
5. 시상 봉합사에서 약 0.7 - 1.0 mm 측면, 신생아 브레그마에서 0.7 - 1.0 mm 꼬리 위치에 무독성 실험실 펜으로 주사 부위를 표시합니다(그림 1A).
6. 표시된 주입 부위에 두개골 표면에 수직으로 2mm 깊이의 바늘을 삽입합니다. 참고로 무독성 메이커로 바늘 끝에서 2mm 떨어진 곳에 표시하십시오.
두피를
7. 열지 않고 5 μl의 MCMV(약 5 × 10⁵ PFU)를 외측심실에 천천히 주입합니다(그림 1B).
8. 다른 마우스 그룹에서도 동일한 방법으로 형광 마이크로비드(0.1 - 0.3 μm, 약 5.75 × 10⁸ 입자)를 포함하는 5 μl 용액을 주입합니다.
9. 역류를 방지하기 위해 플런저 움직임을 중단한 후 10-20초 후에 바늘을 천천히 제거합니다.
10. 회복하려면 움직임과 일반적인 반응성이 회복될 때까지 쥐를 따뜻한 용기에 5-10분 동안 보관하십시오.
11. 주사 후 다양한 시점(3, 12, 24, 48, 72시간)에서 뇌를 적출합니다.

결과

그림 1: 신생아 마우스의 주사 부위. (가, 나) 5μl MCMV(약 5 × 10⁵ PFU) 또는 5 μl 마이크로비드(약 5.75 × 10⁹ 입자)의 ICV 주입. (A) 주사 부위는 귀와 눈 사이의 중간 지점입니다(시상 봉합사 옆으로 약 0.7 - 1.0mm, 신생아 브레그마에서 꼬리 0.7 - 1.0mm 위치). (B) 10μl 주사기가 있는 27G 바늘을 사용하여 두개골 표면에 수직인 2mm 깊이의 외심실에 주입합니다. (C, D) MCMV 또는 마이크로비즈는 신생아 마우스의 측두엽 안면 정맥에 주입됩니다. (C) transilluminator(정맥 측정기)는 표재성 측두(얼굴) 정...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
SPHERO TM 형광 폴리스티렌 나일 레드 0.04-0.06	스페로텍, Inc.	FP-00556-2
SPHERO TM 형광 폴리스티렌 나일 레드 0.1-0.3	스페로텍, Inc.	FP-0256-2
SPHERO TM 형광 폴리스티렌 나일 레드 1.7-2.2	스페로텍, Inc.	FP-2056-2
10% 마우스 세럼	다코	X0910
C57BL/6 마우스	주식회사 SLC
ICR 마우스	주식회사 SLC
변형 마이크로리터 주사기(7000 시리즈)	해밀턴 회사
35 게이지 바늘	사이토 메디컬
pEGFP-N1 벡터	클론텍	#의 6085-1