리솔레시틴(Lysolecithin)을 이용한 시신경의 국소 탈수초화(local demyelination) 유도

초록

출처: You, Y. et al., Visual Evoked Potential Recording in a Rat Model of Experimental Optic Nerve Demyelination. J. Vis. 특급 (2015)

이 비디오는 마취된 동물의 시신경에 외과적으로 접근하여 국소 탈수초를 유도하기 위해 리솔레시틴을 정확하게 전달하여 추가 연구를 위한 신경 병리학적 조건을 만드는 절차를 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 시신경 주사

1. 케타민(75mg/kg)과 메데토미딘(0.5mg/kg)의 복강 내 주사로 동물을 마취합니다.
   메모: 마취 유도 후 금단 반사(핀치 테스트, 각막 및 손바닥 반사 등)와 그 부재를 관찰하여 수술을 시작하라는 표시로 삼습니다. 수술 내내 동물을 지속적으로 모니터링하고 반사가 있는 경우 추가 마취제(보충당 초기 케타민 용량의 10%)를 투여합니다. 성인 쥐 (>12 주)가 실험에 사용됩니다.
2. 수술 부위의 피부를 면도합니다. 수술 중 체온을 유지하기 위해 동물을 보온 패드(37°C)에 올려 놓습니다. 포비돈 요오드의 국소 도포를 통해 피부를 준비합니다. 수술용 드레이핑을 적용합니다. 전신 마취 하에 각막 건조를 방지하기 위해 국소 안과 연고를 바르십시오. 멸균 기구를 사용하여 무균 상태를 유지하십시오.
3. 무작위로 선택된 안와의 안와 위 피부를 1-1.5cm 절개합니다. 미세한 홍채 가위를 사용하여 피하 조직을 열어 안와강에 도달합니다. 작동 현미경으로 결막과 전방 테논 캡슐을 엽니다.
4. 안구 외 근육과 안와내 눈물샘을 수축시켜 약 3mm 길이의 시신경을 노출시킵니다. 안과 칼날을 사용하여 시신경 주위의 경막과 지주막 물질 층을 세로로 엽니다.
5. 유리 피펫을 지구본에서 2mm 후방의 거리에서 시신경에 삽입합니다. 유리 마이크로피펫은 Hamilton 주사기에 부착되어 있습니다.
6. 1% 리솔레시틴(0.4 - 1.0 μl, 0.02% Evan's Blue, 수초화에 영향을 미치지 않음)을 약 30초에 걸쳐 신경에 천천히 주입합니다.
7. 절개 부위를 봉합합니다. 감염을 예방하기 위해 항생제 연고를 바르십시오. 동료 눈은 전기 생리학 녹음을 위한 내부 제어 역할을 할 수 있습니다.
8. 마취에서 회복하기 위해 동물을 보온 패드에 올려 놓습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
케타민 100 mg/ml (케타밀)	트로이 연구소	교류 116
메데토미딘 1 mg/ml (도미터)	화 이자	사우스캐롤라이나-204073
동형발열 블랭킷 시스템	하버드 기구	NC9203819
해밀턴 시린지	해밀턴	87930
리솔레시틴	시그마	엘4129
에반스 블루	시그마	E2129