쥐 모델에서 안면 신경 손상 유도

초록

출처: Ali, S. A., et al. 축삭 억제 및 재생을 연구하기 위한 쥐 모델의 안면 신경 수술. J. Vis. 특급 (2020년)

이 비디오는 마취 준비부터 안면 신경 손상 유도까지 단계를 자세히 설명하는 쥐 모델의 수술 프로토콜을 보여줍니다. 이 프로토콜은 의학 연구에서 신경 재생 및 수술 기법을 연구하는 데 유용합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마취 및 준비

1. 동물을 마취실에 넣고 1.8% 이소플루란과 0.9L/min 산소를 통해 전신 마취를 유도합니다.
   1. 자발적 호흡에 대한 평가를 통해 적절한 마취 평면을 확인하고 발가락 꼬집기에 대한 동물의 찡그린 반응을 평가하여 의식 평가를 확인합니다.
2. 각막 자극이나 건조함을 방지하기 위해 눈 윤활제를 양측으로 바르십시오.
3. 면도기 또는 자동 클리퍼로 수술 부위를 면도하십시오.
   1. 이때 귀표 또는 꼬리 라벨/표시를 통해 쥐를 식별할 수 있는 방법을 확립하십시오.
4. 수술 후 통증을 예방하기 위해 동물의 등을 따라 0.05mg/kg 부프레노르핀을 피하 주사합니다.

2. 수술 접근법 및 부상 패턴

1. 동물을 수술대로 옮기고 노즈콘을 통해 가스 흐름을 계속합니다. 체온을 유지하기 위해 동물과 멸균 필드 아래에 보온 패드가 있는지 확인하십시오.
2. 멸균된 거즈(말아서 테이프로 고정)를 쥐의 목에 올려 목 롤로 사용하십시오. 이것은 수술 부위의 노출을 향상시킬 것입니다. 동물의 적절한 위치는 효율적인 신경 식별 및 해부를 위해 가장 중요합니다.
3. 시술을 위해 동물의 얼굴 피부를 준비합니다. 소독을 위해 클로르헥시딘 또는 70% 에탄올을 번갈아 가며 요오드 기반 용액으로 수술 부위를 세 번 문지릅니다.
4. 원하는 경우 수술 절개 부위를 계획하고 표시합니다. 동측 귀를 전후 방향으로 조작하여 이관 후 피부의 자연스러운 접힘을 확인합니다.
5. 날카로운 홍채 가위 또는 숫자 15 블레이드를 사용하여 귓바퀴 후 주름을 4-5mm 절개합니다. 이는 필요에 따라 절차의 뒷부분에서 확장할 수 있습니다.
6. 즉각적인 피하 근막을 통해 둔감하게 절개하고 마이크로 Weitlaner 견인기를 배치하여 노출을 향상시킵니다. 이 부위에 작은 구경의 혈관이 있을 수 있습니다. 이러한 현상은 Weitlaner 견인기를 통해 상향 또는 하향 후퇴하는 것이 가장 좋습니다.
7. 전방 이위근(anterior digastric muscle)이 두개골 기저부를 따라 삽입하기 위해 하위(infer-superior direction)로 이동할 때 이를 확인합니다.
   1. 삽입 지점을 따라 배꼽 근육을 통해 부드럽게 펴 바르면 앞쪽 이복부의 힘줄이 드러납니다. 힘줄은 두개골 기저부에 단단히 삽입된 근육에서 뿜어져 나오는 필름 같은 흰색 돌기로 나타납니다.
8. 전방 위근과 힘줄을 확인한 후 Weitlaner 견인기를 조정하여 근육 배를 더 수축시킵니다. 이후에 노출된 영역은 안면 신경의 주요 몸통이 있는 3차원 공간입니다.
   메모: 이 영역은 두개골 기저부에 의해 상부 및 내측으로, 측면으로는 전방 이복근에 의해, 후방으로 외이도에 의해, 그리고 표재성 측두동맥을 포함한 목의 구조에 의해 하부로 경계를 이룹니다.
9. 적절한 노출 후, 이위근(digastric muscle)의 힘줄 아래에서 하향 이동하면서 두개골 기저부에서 스타일로마스토이드 구멍(stylomastoid foramen)을 빠져나갈 때 안면 신경의 주요 몸통을 확인합니다. 신경은 동물의 이하선-교근막(parotid-masseteric fascia)에 싸인 진주빛 흰색 끈으로 나타납니다. 다음과 같은 이유로 신경을 더 노출시킬 때 주의하십시오.
   1. 스트레치 매개 신경장애인 부상을 방지하기 위해 공격적인 해부 또는 수직 퍼짐을 피하십시오.
   2. 외이도 위에 있는 얇은 조직을 침범하지 않도록 하기 위해 공격적인 후이 및 내측 절개를 피하십시오.
   3. 넓은 내측 및 하향 절개를 통해 표재성 측두 동맥이 손상되지 않도록 합니다. 부상은 활발한 박동성 출혈로 식별됩니다.
      1. 동맥이 손상된 경우 솜 끝이 있는 애플리케이터나 집게를 통한 멸균 거즈로 즉시 압력을 가하십시오. 지혈제 또는 액체 피브린 실란트를 가까운 곳에 배치할 수 있습니다. 동물은 체액 안정화를 위해 0.9% 멸균 식염수의 피하 주사가 필요할 수 있음을 명심하십시오.
10. 신경을 따라 아래쪽 방향으로, stylomastoid foramen의 출구에서 원위적으로 절개하여 주요 몸통을 원위적으로 추적합니다.
    1. 신경과 그 가지가 완전히 드러나도록 원래 절개 부위를 확장합니다. 이하선(parotid gland)을 파괴하면 수술 후 시알로셀(sialocele)이 발생할 수 있으므로 피하십시오.
11. 다음과 같이 원하는 부상 패턴을 유도합니다.
    1. 압착 부상의 경우 매끄러운 표면의 보석상 겸자를 사용하여 신경을 단단히 잡고 압박하십시오.9 적절한 압착 부상을 보장하기 위해 30초 동안 신경에 지속적이고 재현 가능한 압력을 가합니다.
    2. 간단한 절개를 위해 신경 위에 있는 근막 또는 즉각적인 상추를 가는 집게로 잡고 날카로운 마이크로 가위를 사용하여 한 번의 절단으로 원하는 지점의 신경을 깨끗하게 절제합니다. 겸자로 신경을 과도하게 견인하지 않도록 주의하십시오.
    3. 신경 갭 모델의 경우 단순 횡단 손상과 유사한 방법을 사용하여 원하는 신경 갭을 만듭니다. 동물 간의 부상 패턴의 유사성을 보장하기 위해 수술 중 원하는 신경 틈새까지 길이로 절단된 솜 끝이 있는 어플리케이터의 멸균 샤프트를 사용하십시오.

3. 상처 봉합

1. 멸균 식염수로 상처를 세척하고 멸균 거즈로 말리십시오.
2. 흡수성 봉합사를 사용하여 간단한 피하 방식으로 피부 가장자리를 대략적으로 만들거나 상처 봉합에도 허용되는 피부 접착제 또는 상처 클립을 사용합니다. 한쪽 피부 가장자리를 깊숙이 물린 다음 반대쪽 피부 가장자리를 표면에서 깊게 물려 묻힌 스티치를 놓습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1.8% 이소플루란	베트원	13985-030-40
11-0 나일론 미세 봉합사	ARO수처	TK-117038
4-0 단액 봉합사	폭스바겐	제75982-084
부프레노르핀 SR	주팜	MIF 900-006
카르프로펜	시그마-알드리치	MFCD00079028
클로르헥시딘	폭스바겐	IC19135805
보석상 겸자	폭스바겐	21909-458
마이크로 Weitlaner 견인기	폭스바겐	82030-146
마이크로 가위	폭스바겐	제100492-348
미니 tenotomy 가위	폭스바겐	89023-522
번호 15 메스 칼날	폭스바겐	제102097-834
작동 현미경	라이카
바셀린 아이 젤	파마덤	B002LUWBEK
멸균수	폭스바겐	89125-834
티슈 접착제	베트본드, 3M	NC9259532
물 도체 패드	아쿠아 릴리프 시스템	ARS2000B

호 (영문) 년 년 호 호