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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. 두개골 절제술 및 통제된 피질 충격
- 통제되는 피질 충격 장치 및 수술 용품의 준비.
- 상처 세척을 위해 1mL 슬립 팁 주사기에 0.5mL의 멸균 식염수를 로드합니다. 주사기에 25G 바늘을 연결하여 세척을 조절합니다.
- 디메틸 설폭사이드(DMSO)에 묽은 사이클로스포린 A(CsA) 용액을 1mg/mL의 최종 농도로 준비합니다. 면역 억제를 위해 두 번째 1mL 슬립 팁 주사기에 0.5mL의 CsA 용액을 로드합니다. CsA 주사기에 25G 이상의 바늘을 부착합니다.
- 제어된 피질 충격 피스톤을 입체 프레임의 암에 부착하고 15° 각도로 설정합니다. 피스톤에 3mm 임팩터 프로브를 부착합니다.
- 경미한 피질 손상을 일으키기 위해 충격 속도를 1.5m/s로 설정하고 충격 체류 시간을 0.1초로 설정합니다.
- 편측성 두개골 절제술 시행
- 압축 산소 공급원이 있는 이소플루란 기화기에 연결된 마취 유도실에 마우스를 놓습니다. ~0.7L/min 산소에서 ~3% 이소플루란으로 마취를 유도합니다. 발가락 꼬집음에 대한 반응이 없어 마취의 깊이를 확인하십시오.
- 전기 이발기를 사용하여 두피를 면도하고 느슨한 털을 닦아냅니다.
- 마취제 전달 노즈 콘이 부착된 입위 프레임에 마우스를 놓습니다.
- 마우스 아래의 정위 프레임에 37°C 보온 패드를 놓고 마취 상태에서 체온을 유지합니다. 이어바와 바이트 바를 사용하여 머리를 제자리에 고정하고 두개골 정면 뼈가 수평이 되도록 머리의 방향을 잡습니다. 수술 기간 동안 ~1.5%-2% 이소플루란으로 마취를 유지하십시오.
- 수술 전 관리 및 무균 수술 준비를 수행하려면 멸균 면봉을 사용하여 항생제 안과 연고를 눈에 도포합니다. 면도한 두피 부위에 요오드 기반 용액을 바릅니다. 이것을 70% 에탄올로 제거하십시오. 천공 수술용 드레이프로 동물을 덮어 머리 꼭대기는 보이지만 눈은 가리도록 합니다.
- 메스나 가위를 사용하여 두피의 정중선(1.5-2cm)을 절개합니다. 멸균 면봉을 사용하여 상처를 청소하고 브레그마에서 정중선 왼쪽의 근막을 청소합니다.
- 임팩터 프로브를 사용하여 두개골 절제술 부위를 식별합니다.
- 입체 참조점(X = 0, Y = 0)을 브레그마로 설정합니다. 프로브를 중앙선에서 왼쪽으로 2mm 옆으로 조정합니다. 수술적으로 안전한 미세한 팁을 사용하여 프로브 주위에 직경 5mm의 원을 그립니다. 임팩터를 들어 올려 제자리에서 빼냅니다.
- 고속 회전식 마이크로모터 키트 수공구를 사용하여 ~70%-80% 최대 속도로 0.6mm 또는 0.8mm 둥근 팁 드릴 비트를 사용하여 두개골에 열린 구멍을 만듭니다. 두개골에 가벼운 압력을 가하면서 5mm 둘레 윤곽을 따라 구멍을 뚫어 이 테두리를 얇게 만듭니다.
- 드릴링하는 동안 과도한 압력을 가하지 마십시오. 진동, 압박 또는 우발적인 삽입은 피질 손상을 유발할 수 있습니다. 대신 드릴 비트의 속도가 작업을 수행하도록 하십시오.
- 두개골의 과도한 마찰 가열을 피하기 위해 주어진 부위를 너무 오랫동안 뚫지 마십시오. 때때로 멸균 식염수로 두개골 절제술을 세척하여 파편을 제거하고 회전 도구의 가열을 줄이십시오.
- 관상 봉합선을 뚫는 동안 이 지점은 출혈에 취약하므로 세심한 주의를 기울이십시오.
- 가느다란 핀셋을 사용하여 두개골 절제술 윤곽이 충분히 얇아지면 두개골 플랩을 제거합니다. 플랩을 내측으로 잡고 방사형 동작으로 부드럽게 들어 올려 옆으로 당깁니다.
- 플랩을 들어 올릴 때 경막을 손상시키지 마십시오.심각한 부상과 출혈을 유발할 수 있습니다.
- 경미하게 통제된 피질 충격 손상 수행
- 멸균 알코올 준비 패드로 임팩터 프로브를 청소합니다. 임팩터 프로브를 노출된 피질 위의 위치로 다시 이동합니다. 경막 표면에 닿을 때까지 프로브를 내립니다. 이 위치를 Z = 0으로 표시합니다.
- 피스톤을 빼내고 Z = -1.0mm로 이동합니다. 피스톤을 방전하여 피질에 충격을 가합니다.