전기 자극을 사용하여 쥐 모델에서 급성 폰스 경색 유도

초록

출처: Luo, M., et al. 전기 자극에 의한 쥐의 급성 폰틴 경색의 확립. J. Vis. 특급 (2020년)

이 비디오는 전기 자극을 사용하여 마취된 쥐의 폰즈에서 조직 손상 또는 경색을 유도하는 절차를 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 폰에 경색의 확립

1. 마취 직전에 발열 패드를 예열하십시오.
2. 두개골 드릴을 입체 프레임의 홀더에 부착합니다.
3. 쥐에게 50mg/kg 케타민과 5mg/kg 자일라진을 복강내 주사합니다. 발가락 꼬집음 반응이 없는지 확인하십시오.
4. 엎드린 자세로 입체 안경테에 쥐를 장착합니다. 이어바를 외이도 위에 배치하여 머리를 고정합니다. 주사가 비뚤어지지 않도록 두개골이 수평으로 유지되는지 확인하십시오.
5. 입구와 출구 포트가 있는 쥐를 위한 입체택시 노즈 콘 부착물을 통해 이소플루란(100% 산소, 2.5% 이소플루란)으로 마취를 유지합니다. 가열 패드를 사용하여 온도를 37°C로 유지하고 절차 전반에 걸쳐 모니터링합니다.
6. 각막의 건조를 방지하기 위해 안연고를 사용하십시오. 통증 반응이 조금도 나타나지 않도록 집게를 사용하여 발을 꼬집습니다.
7. 마이크로 면도기로 두개골의 털을 면도합니다. 클로르헥시딘 수술용 스크럽을 수술 절개 부위에서 시작하여 바깥쪽으로 회전하며 원형으로 바릅니다.
8. 양측 외측 안각 선에서 수술용 마커 펜으로 표시해야 하는 후천문 뒤 0.5cm까지 메스로 3cm의 정중선을 절개합니다.
9. 면봉을 사용하여 혈액을 제거하십시오.
10. 두피가 노출되도록 피부 피판의 양쪽에 수술용 테이프를 붙여야 합니다(그림 1).
11. 0.9% NaCl에 적신 면봉으로 두개골 뼈의 결합 조직을 부드럽게 제거합니다. 제거하지 않으면 결합 조직이 드릴에 끼게 됩니다.
12. 브레그마를 식별합니다. 브레그마의 중심점을 원점으로 선택하고 끝이 가는 검은색 수술용 마커 펜을 사용하여 표시합니다.
13. 6.0mm AP, 2.0mm ML(0.5–3.0mm 범위, 그림 2A)에 드릴을 놓습니다.
14. 자동 드릴을 사용하여 개두술(직경 1mm)을 수행합니다. 이 지점은 정맥동에 가깝기 때문에 조심스럽게 진행하십시오.
15. 입체성 프레임에서 드릴을 제거합니다.
16. 절연 피복이 있는 22G 프로브를 입방성 프레임에 놓습니다(그림 3A). 프로브 팁은 피복의 근위 끝에서 2mm 위에 위치해야 합니다(그림 3A, B; 그림 2B).
17. 칼집이 뇌에 7mm(7mm DV, 그림 2B; 그림 1C).
18. 프로브의 끝이 뇌 표면에서 9mm 아래에 있을 때까지 덮개를 따라 프로브를 전진시킵니다(그림 2D).
19. 전극을 전기 자극기에 연결합니다(그림 3C). 그림 1D와 같이 양극을 프로브에 연결합니다. 음극을 쥐에 연결하십시오 (보통 쥐의 귀에).
20. 전기 자극기를 켜고 단일 펄스 폭 = 4,050ms, 전압 = 50V, 전류 = 4mA 매개변수를 설정합니다(그림 3C). 전기 자극을 받는 동안 쥐는 떨림을 보일 것입니다. 이 연구에서는 행동 테스트, MRI 및 TTC에 사용된 대조군 쥐에 대해 장치를 켜지 않았습니다.
21. 자극 후 5분 동안 프로브를 제자리에 두십시오.
22. 뇌에서 프로브를 제거합니다(그림 1F).
23. 뼈 시멘트를 사용하여 개두술을 덮습니다. 상처 봉합 전에 시멘트를 건조시키십시오.
24. 4-0 폴리아미드 봉합사 필라멘트로 상처를 봉합합니다. 3-4 바늘 후 2-1-1 표준 수술 매듭을 묶습니다.
25. 감염을 예방하기 위해 쥐에게 페니실린(0.25mL, 식염수 4mL에 희석된 80IU)을 복강내 주사합니다.
26. 쥐에게 2mg/kg의 용량으로 멜록시캠을 피하로 주입한 다음 24시간마다 반복합니다.
27. 완전히 깨어날 때까지 15분마다 쥐를 모니터링하고 발열 패드를 사용하여 쥐를 우리로 되돌려 놓습니다. 희생 제물이 될 때까지 음식과 물을 무료로 이용할 수 있게 해주세요.
    메모: 모든 절차는 무균 수술 원칙을 따라야 합니다. 수술 전에는 수술용 스크럽 상의, 수술용 마스크, 멸균 장갑을 착용하고 손을 수술한 후 착용하십시오. 항상 멸균 영역 내에서 멸균 봉합사 재료를 유지하십시오.

결과

그림 1: 경색 설정. (A) 두개골에 생긴 구멍. (B) 피복이 구멍으로 이동됩니다. (C) 피복의 주입. (D) 프로브 주입. (E) 양극(빨간색 화살표)이 연결되어 있습니다. (F) 프로브가 제거됩니다. (G) 뇌 표면에 남겨진 구멍(빨간색 화살표).

그림 2: ...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
4-0 성공	상하이 Jinzhong		수술 기구
접착 테이프	상하이 Jinzhong		수술 기구
동물 마취 시스템	RWD		시스템 사용 시 마스크 착용
뼈 시멘트	상하이 Jinzhong		수술 기구
경화 클램프	상하이 Jinzhong		수술 기구
일반 티슈 가위	상하이 Jinzhong		수술 기구
인도포르	중국의 Guoyao		멸균
이소플루란	RWD	217181101
병변 만들기 장치	상하이 위옌		병변 만들기
MRI 시스템	브루커 바이오스핀		in vivo 경색 확인
바늘 홀더	상하이 Jinzhong		수술 기구
페니실린	중국의 Guoyao		감염 예방
탐침	앙케		약간의 수정이 필요합니다
Q-팁	상하이 Jinzhong		수술 기구
가위 깎기	상하이 Jinzhong		수술 기구
입체택시 장치	RWD
봉합사 바늘	상하이 Jinzhong		수술 기구
조직 보유 교훈	상하이 Jinzhong		수술 기구
티씨씨	시그마-알드리치	BCBW5177	in vitro 경색 확인을 위해

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