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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. 동맥 카테터 삽입
- 케타민과 자일라진의 복강 내 주사와 현지 관행에 따라 진통제(예: 부프레노르핀)로 마우스를 마취합니다. 올바른 마취 깊이를 확인하기 위해 집게로 뒷다리를 꼬집습니다.
메모: 이 연구를 위해 8-12주 령의 수컷 C57BL/6N 마우스(무게 20-25g)를 사용했습니다. 저자는 같은 나이의 수컷 BALB/c를 시험했지만 실패했지만 다른 균주는 시도하지 않았습니다.
- 전기 면도기를 사용하여 관심 영역(머리, 목)의 머리카락을 제거합니다. 상처 오염을 방지하기 위해 느슨한 머리카락이 남지 않도록 하십시오. 그런 다음 70% 에탄올/클로르헥시딘/베타딘으로 수술 부위를 소독하고 머리가 외과의를 향하도록 마우스를 누운 자세로 놓습니다.
- 절개 가위로 경추 정중선을 절개합니다.
- 턱밑샘과 목 근육 조직을 절개하고 분리하여 총경동맥을 노출시킵니다. 주로 집게를 통한 둔기 해부를 사용하십시오.
- 3위 8-0 오른쪽 총경동맥 아래에 실크 결속이 있습니다.
- 근위 결찰에 클램프를 놓고 동맥에 긴장을 가하여 흐름이 중단되도록 합니다.
- 가장 원위부 합자를 닫습니다.
- 절개 부위의 두개골 쪽에 미리 형성된 작은 피부 구멍을 통해 동맥 카테터를 삽입합니다. 카테터의 내강이 너무 커서 혈액 역류를 줄일 수 없는 경우 짜내고 변형시킵니다. 세 개의 합자로 모두 고정합니다.
- 탈구를 방지하기 위해 카테터를 피부에 고정합니다. 카테터를 미리 형성된 피부 구멍 영역의 피부에 연결하는 봉합사(예: 5-0 모노필라멘트, 비흡수성)를 사용하여 이를 수행합니다.
2. 기관절개술
- 겸자를 사용하여 기관전 근육 조직을 둔탁하게 절개합니다.
- 2위 8-0 기관 아래의 실크 결속
.
- 편측성 환기를 피하기 위해 가능한 한 근접하게 마이크로 가위를 사용하여 기관절개술합니다. 두 기관 연골 사이에 수평 절단선을 사용합니다.
- 환기 튜브를 삽입하고 준비된 두 합자로 고정합니다.
메모: 기관의 근위부 끝은 결찰할 필요가 없습니다.
- 흐르는 봉합사(예: 6-0 모노필라멘트, 비흡수성)로 피부를 닫습니다.
- 150/min의 빈도와 200μL의 일회 호흡량으로 마우스를 환기시킵니다.
3. 뇌사(BD) 유도
- 마우스를 엎드린 위치에 놓습니다.
- 수술용 가위와 집게를 사용하여 피부를 잡고 두개골에서 피부를 제거합니다.
- 왼쪽 두정엽 피질 위에 1mm 구경의 시추공을 뚫습니다. 내부의 조밀한 뼈와 경막을 파괴하기 전에 드릴링을 중지하십시오.
- 뭉툭한 집게를 사용하여 두개골의 최종 조직 다리를 관통하여 날카로운 모서리를 제거합니다.
- 풍선 카테터를 삽입하여 완전히 두개강 내에 있도록 합니다. 풍선에 식염수가 미리 채워져 있고 모든 공기가 배출되었는지 확인하십시오.
- 주사기 펌프를 사용하여 10-15분(총 부피 0.8-1.2mL)에 걸쳐 ~0.1mL/분에서 팽창을 시작합니다.
메모: 마우스는 myoclonus, mydriasis, 추가 발작 활동 및 고통스러운 헐떡임을 나타냅니다.
- 쥐의 꼬리가 뻣뻣해지고 세워지면 쥐의 뇌가 죽었다고 발음합니다.
메모: BD는 특징적인 초기 혈압 피크(쿠싱 반사), 뇌간 반사의 부재 및 자발적 호흡으로 확인됩니다. 실험 중에는 생쥐가 산소 부족으로 인해 순환계가 불안정해질 수 있으므로 정기적인 무호흡 검사는 피해야 합니다.
- 풍선 카테터의 팽창을 멈춥니다.
- 저체온증을 피하기 위해 마우스 위에 난방 담요를 씌웁니다.