풍선 카테터를 사용한 마우스 모델에서 뇌사 유도

초록

출처: Ritschl, P. V., et al. 기관절개술을 통한 동맥내 혈압 모니터링 및 환기를 사용한 마우스의 뇌사 유도. J. Vis. 특급 (2020).

이 비디오는 자연 뇌사를 모방하여 풍선 카테터를 통해 제어된 두개내압을 증가시켜 마우스 모델에서 뇌사를 유도하는 절차를 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 동맥 카테터 삽입

1. 케타민과 자일라진의 복강 내 주사와 현지 관행에 따라 진통제(예: 부프레노르핀)로 마우스를 마취합니다. 올바른 마취 깊이를 확인하기 위해 집게로 뒷다리를 꼬집습니다.
   메모: 이 연구를 위해 8-12주 령의 수컷 C57BL/6N 마우스(무게 20-25g)를 사용했습니다. 저자는 같은 나이의 수컷 BALB/c를 시험했지만 실패했지만 다른 균주는 시도하지 않았습니다.
2. 전기 면도기를 사용하여 관심 영역(머리, 목)의 머리카락을 제거합니다. 상처 오염을 방지하기 위해 느슨한 머리카락이 남지 않도록 하십시오. 그런 다음 70% 에탄올/클로르헥시딘/베타딘으로 수술 부위를 소독하고 머리가 외과의를 향하도록 마우스를 누운 자세로 놓습니다.
3. 절개 가위로 경추 정중선을 절개합니다.
4. 턱밑샘과 목 근육 조직을 절개하고 분리하여 총경동맥을 노출시킵니다. 주로 집게를 통한 둔기 해부를 사용하십시오.
5. 3위 8-0 오른쪽 총경동맥 아래에 실크 결속이 있습니다.
6. 근위 결찰에 클램프를 놓고 동맥에 긴장을 가하여 흐름이 중단되도록 합니다.
7. 가장 원위부 합자를 닫습니다.
8. 절개 부위의 두개골 쪽에 미리 형성된 작은 피부 구멍을 통해 동맥 카테터를 삽입합니다. 카테터의 내강이 너무 커서 혈액 역류를 줄일 수 없는 경우 짜내고 변형시킵니다. 세 개의 합자로 모두 고정합니다.
9. 탈구를 방지하기 위해 카테터를 피부에 고정합니다. 카테터를 미리 형성된 피부 구멍 영역의 피부에 연결하는 봉합사(예: 5-0 모노필라멘트, 비흡수성)를 사용하여 이를 수행합니다.

2. 기관절개술

1. 겸자를 사용하여 기관전 근육 조직을 둔탁하게 절개합니다.
2. 2위 8-0 기관 아래의 실크 결속
.
3. 편측성 환기를 피하기 위해 가능한 한 근접하게 마이크로 가위를 사용하여 기관절개술합니다. 두 기관 연골 사이에 수평 절단선을 사용합니다.
4. 환기 튜브를 삽입하고 준비된 두 합자로 고정합니다.
   메모: 기관의 근위부 끝은 결찰할 필요가 없습니다.
5. 흐르는 봉합사(예: 6-0 모노필라멘트, 비흡수성)로 피부를 닫습니다.
6. 150/min의 빈도와 200μL의 일회 호흡량으로 마우스를 환기시킵니다.

3. 뇌사(BD) 유도

1. 마우스를 엎드린 위치에 놓습니다.
2. 수술용 가위와 집게를 사용하여 피부를 잡고 두개골에서 피부를 제거합니다.
3. 왼쪽 두정엽 피질 위에 1mm 구경의 시추공을 뚫습니다. 내부의 조밀한 뼈와 경막을 파괴하기 전에 드릴링을 중지하십시오.
4. 뭉툭한 집게를 사용하여 두개골의 최종 조직 다리를 관통하여 날카로운 모서리를 제거합니다.
5. 풍선 카테터를 삽입하여 완전히 두개강 내에 있도록 합니다. 풍선에 식염수가 미리 채워져 있고 모든 공기가 배출되었는지 확인하십시오.
6. 주사기 펌프를 사용하여 10-15분(총 부피 0.8-1.2mL)에 걸쳐 ~0.1mL/분에서 팽창을 시작합니다.
   메모: 마우스는 myoclonus, mydriasis, 추가 발작 활동 및 고통스러운 헐떡임을 나타냅니다.
7. 쥐의 꼬리가 뻣뻣해지고 세워지면 쥐의 뇌가 죽었다고 발음합니다.
   메모: BD는 특징적인 초기 혈압 피크(쿠싱 반사), 뇌간 반사의 부재 및 자발적 호흡으로 확인됩니다. 실험 중에는 생쥐가 산소 부족으로 인해 순환계가 불안정해질 수 있으므로 정기적인 무호흡 검사는 피해야 합니다.
8. 풍선 카테터의 팽창을 멈춥니다.
9. 저체온증을 피하기 위해 마우스 위에 난방 담요를 씌웁니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
동맥 카테터 (BD Neoflon 26G)	BD (영어)	391349
혈압 트랜스듀서(APT300)	하버드 장치 Inc.	Tel.: 73-3862
포가티 동맥색전절제술 카테터 N° 3	Edwards Lifesciences Corporation (영문	120403에프
집게	증권 시세	11271-30
유연한 프로브를 사용한 Homeothermic Blanket Systems	하버드 장치 Inc.	제55-7020
케탄솔	그레이웁	6680110
마이크로 가위	증권 시세	15018-10
바늘 홀더	증권 시세	12060-02
프롤렌 5-0	에티콘	8698H
펌프 11 엘리트 인퓨전 전용 싱글	하버드 장치 Inc.	70-4500
시저	증권 시세	14075-11
정위 현미경	올림푸스	SZX7
트랜스포어 테이프	3엠	1527-1
언더패드	몰리네아.A	274301
마우스용 인공호흡기(MiniVent 모델 845)	하버드 장치 Inc.	우편번호 73-0043
자일라솔	그레이웁	7630109

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