쥐 모델에서 레이저 유도 뇌 손상 수행

초록

출처: Kuts, R., et al. 쥐의 운동 피질에서 레이저 유발 뇌 손상. J. Vis. 특급 (2020)

이 비디오는 레이저를 사용하여 쥐의 운동 피질에서 정확하고 통제된 뇌 손상을 생성하는 절차를 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 레이저 유도 뇌 손상 실험 절차

1. 산소에 2% 이소플루란을 혼합하여 쥐를 마취시켜 자발적인 환기를 가능하게 합니다. 집게로 꼬리를 꼬집어 충분한 마취 깊이를 확인하여 금단 반사가 없는지 확인합니다.
2. 직장 온도 조절 가열 패드를 사용하여 실험 과정 전반에 걸쳐 쥐의 심부 체온을 37°C로 유지합니다.
3. 면도기로 현지 모발을 제거하고 70% 알코올과 0.5% 클로르헥시딘 글루코네이트로 소독합니다. 치료 단계를 두 번 더 반복합니다.
   참고: 외과적 절개 부위의 너비는 약 3cm여야 합니다. 절개 부위 주위로 최소 2cm 떨어진 털을 제거합니다.
4. 엎드린 자세로 입체 헤드 홀더에 쥐를 놓습니다. 두피를 측면으로 반사하도록 3cm 절개를 만들고 Bregma와 Lambda 사이의 영역을 노출시킵니다.
5. 콧방울을 통해 마취를 유지하십시오.
6. 네오디뮴-YAG(Nd-YAG) 레이저(피크 파장 1064nm)를 사용하여 1초 펄스 지속 시간으로 50J X 10 포인트를 우반구 위의 두개골 노출 영역에 투여합니다.
7. 레이저 빔을 생성하기 위해 장치의 레이저 생성 부분이 노출 영역에서 2mm 떨어져 있는지 확인하십시오. 50J X 10 포인트는 다양한 에너지/표면 조합을 주의 깊게 평가한 후 선택되었습니다. 이 조합은 효율적이며 투여 후 1초 미만으로 두개골의 뼈 파괴를 일으키지 않습니다.
   참고: 2mm는 레이저 빔의 단자(통과하는 광 케이블에서)와 두개골 뼈 사이의 거리입니다. 포커싱 렌즈를 사용하는 경우 원하는 손상 영역에서 빔의 초점을 맞추기 위해 렌즈의 경사각을 고려하여 거리를 계산해야 합니다. 레이저 장치를 사용할 때 적절한 교육 및 눈 보호를 포함하여 적절한 안전을 보장하십시오.
8. 장치에서 쥐를 제거하고 3-0 실크 수술 봉합사로 두피를 닫습니다.
9. 마취를 중단하고 회복을 위해 쥐를 우리로 되돌립니다. 수술 직후 통증을 줄이기 위해 0.25% 부피바카인 0.1mL를 국소적으로 투여합니다.
   메모: 전체 절차는 올바르게 수행되면 5분 미만으로 지속되어야 합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Brain & Tissue Matrices (뇌 & 조직 매트릭스)	시그마 - 알드리치	15013
디지털 저울	시그마 - 알드리치	RS 4000
에탄올 96 %	로미컬		가연성 액체
온도계가 있는 히터	발열 패드-1	모델: HEATINGPAD-1/2
주입 커프	증권 시세	IC-500
이소플루란, USP 100%	피라마말 크리티컬 케어, Inc	표준편차치 66794-017
메스 칼날 11	시그마 - 알드리치	S2771
Sharplan 3000 Nd:YAG(네오디뮴 도핑 이트륨 알루미늄 가넷) 레이저 기계	레이저 산업 주식회사
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