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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. 레시니페라톡신(RTX) 신경병증 확립
주의: RTX는 신경독성이 있으며 위험합니다. 접촉하면 눈, 점막, 상부 호흡기에 자극제로 작용합니다. RTX 준비 중에는 흡입을 피하고 실험실 안경과 코트를 착용하십시오. 피부에 닿았거나 취급 후에는 다량의 물로 헹굽니다.
- 동일한 부피의 Tween 80과 절대 에탄올(각 용매당 100μL)의 200μL 혼합물에 RTX 분말 1mg을 추가합니다.
- RTX 용액(12 μL/바이알)을 분취하고 -20 °C에서 최대 3개월 동안 보관합니다. 이것이 RTX 스톡을 구성합니다. 만료 시 나머지 RTX 솔루션을 폐기합니다.
- RTX 스톡을 일반 식염수로 최종 부피 600μL로 희석합니다. RTX 용액의 최종 농도는 0.01%여야 하며, 이는 10μL 차량 용액에서 1μg RTX와 같습니다.
- 8주 된 성인 수컷 ICR 마우스(35-40g)를 실험 동물로 사용하고 마우스에 마이크로 주입 주사기로 RTX 용액(용량: 각각 200, 50 및 10μg/kg)을 복강내(ip)로 1회 투여합니다.마우스는 심층 마취를 위해 5% 이소플루란이 포함된 흡입기로 마취했습니다. RTX 주입 중 마우스가 사지의 금단 작용을 보이면 마우스는 마취 흡입을 더 오래 해야 합니다.
예: 마우스의 무게가 40g인 경우 50μg/kg의 선량을 나타내는 20μL의 RTX 솔루션을 받게 됩니다.
- 한 그룹의 마우스에 동일한 부피의 비히클(식염수 내 10% Tween 80 및 10% 절대 에탄올)을 대조군으로 제공합니다.
- RTX 주입 후 12시간 라이트/12시간 다크 사이클로 마우스를 플라스틱 케이지에 다시 넣고 음식과 물을 임의로 제공합니다.