초파리 파리에서 폐쇄성 두부 외상성 뇌 손상을 입히는 기술

초록

출처: Sun, M., et al. 초파리에서 만성 외상성 뇌병증을 모델링하는 새로운 방법. J. Vis. 특급 (2017).

이 비디오는 가스 추진 충격기가 있는 타격 장치를 사용하여 마취된 초파리 파리에게 폐쇄 머리 외상성 부상을 입히는 절차를 보여줍니다. 부상은 신경 기능에 영향을 미치고 보행 능력을 손상시킵니다.

프로토콜

1. 스트라이크 장치의 조립 (그림 1)

1. 1mL 투베르쿨린 주사기에서 플런저를 제거합니다. 1mL 표시에서 배럴을 자릅니다.
2. 200 μL 피펫 팁에서 에어로졸 장벽(높이 3 mm x 직경 4 mm)을 제거하고 임팩터로 사용합니다. 임팩터를 주사기 배럴 안에 넣습니다. 배럴을 부드럽게 두드려 임팩터를 팁 끝으로 이동하고 평평한 면이 노즐 개구부를 덮습니다.
3. Drosophila 마취 스테이션의 이산화탄소(CO₂) 유량 조절기에 연결된 플라스틱 튜브에 배럴 끝 끝을 부착합니다.
4. 배럴을 수직으로 잡고 clamp 표준 cl에 clamp 임팩터가 배럴 바닥에 유지되도록 홀더 스탠드.
5. 200 μL 피펫 팁을 수정하여 플라이 홀더를 만듭니다.
   1. 팁에서 4mm를 잘라 직경 0.8mm의 구멍을 만들어 플라이 헤드만 노출되도록 합니다.
      알림: 흉부와 플라이 몸체의 다른 모든 부분은 피펫 팁 내부에 남아 있습니다.
6. 1,000 μL 피펫 팁과 1 mL 주사기 니들 캡을 수정하여 커넥터를 만듭니다.
   1. 팁 입구에서 44mm 잘라냅니다. 6mm 길이의 1mL 주사기 니들 캡을 1,000μL 피펫 팁의 나머지 부분에 단단히 밀어 넣습니다.

2. 타격 장치의 작동

1. 플라이 패드에 CO₂를 사용하여 2일 된 성인 암컷 파리 한 마리를 마취합니다.
2. 가는 브러시를 사용하여 플라이 홀더에 부드럽게 옮깁니다. 플라이 헤드가 팁 끝 바깥쪽으로 보이도록 홀더를 부드럽게 두드립니다. 파리 주둥이가 팁 바깥쪽에 노출되어 있으면 무딘 1mL 주사기 바늘을 사용하여 팁 안쪽으로 부드럽게 밀어 넣습니다.
   메모: 플라이 코를 홀더 안에 보관하십시오. 그렇지 않으면 파리가 빨아들이는 부상으로 죽을 수 있습니다.
3. 플라이 헤드가 아래를 향하도록 커넥터를 사용하여 플라이 홀더를 주사기 배럴에 조입니다.
4. 가스 압력을 100kPa로 설정합니다. 실험 설계에 따라 유량을 조정합니다.
5. 유량 조절기 토글 스위치를 빠르게 켜고 끄면 임팩터가 플라이 헤드에 한 번 부딪히게 됩니다.
6. 플라이 홀더를 들어 올려 플라이 패드 위로 이동합니다. 플라이 홀더를 뒤집고 측면을 부드럽게 두드려 플라이가 나오도록 합니다. 회복을 위해 파리를 빈 유리병에 그대로 두십시오.

결과

그림 1. 스트라이크 장치의 다이어그램. 이 장치는 초파리 실험실에서 쉽게 구할 수 있는 재료(1) 200μL 피펫 팁, 2) 1mL 투베르쿨린 주사기, 3) 임팩터, 4) 초파리 마취실에 연결된 연결 튜브, 5) 팁을 주사기에 조이기 위한 커넥터.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
에어로졸 장벽	미국 과학	제1120-8810	임팩터로 사용
200 ul 피펫 팁	미국 과학	제1111-0706	플라이 헤드 홀더로 사용
1000 ul 피펫 팁	미국 과학	1122-1830	커넥터로 사용
투베르쿨린 주사기 1ml	벡턴 디킨슨(Becton Dickinson)	309625
60mm 페트리 접시	피셔 사이언티픽	FB0875713A	추적 경기장으로 사용
유량 조절기	제네시 사이언티픽	59-122WC
표준 클램프 홀더/스탠드	EISCO 사이언티픽	채널 0688
파인 브러쉬	제네시 사이언티픽	59-204
플라이패드	제네시 사이언티픽	59-114

호 호 년 년 년