신생아 저산소성-허혈성 뇌 손상의 마우스 모델 확립

초록

출처: Kim, M., et al. 신생아 저산소성 허혈성 뇌 손상의 마우스 모델에서 신경 행동 평가. J. Vis. 특급 (2017).

이 비디오는 신생아 저산소성-허혈성 뇌 손상을 연구하기 위한 마우스 모델을 만드는 절차를 보여줍니다. 외과적으로 허혈을 유도하고 동물에게 저산소증을 가하여 뇌 손상을 악화시키는 단계를 설명합니다. 마지막으로, 결과로 생성된 뇌 병변을 평가하는 방법을 보여주어 마우스 모델이 추가 과학적 조사를 위해 준비되었는지 확인합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 신생아 HI 뇌 손상의 마우스 모델

1. 이소플루란으로 새끼를 마취합니다.
   1. 새끼(5마리 미만)를 마취 상자에 넣고 뚜껑을 닫습니다.
   2. 약 15분 동안 마취 시스템을 켭니다. 탁상용 마취기를 사용하여 가스와 이소플루란을 조정합니다. 산소 유량계를 1.5L/min으로 조정합니다. 마취 유도를 위해 이소플루란 기화기를 3-5%로 조정합니다.
   3. 15분 후 마취 유지를 위해 이소플루란 기화기를 1-2%로 조정합니다.
2. 완전히 마취된 강아지를 해부 현미경(복부가 연구원을 향함) 아래에 눕히고 테이프로 고정합니다.
3. 멸균된 가위를 사용하여 목을 ~0.7mm 절개합니다.
4. 멸균된 겸자를 사용하여 지방 조직을 조심스럽게 제거하고 편측성 오른쪽 경동맥을 노출시킵니다.
5. 편측성 우측 경동맥을 5-0 흡수성 봉합사로 결찰합니다.
6. 절개 부위를 5-0 봉합사로 봉합합니다.
7. 회복을 위해 각 강아지를 37°C의 따뜻한 저산소 챔버에 1시간 동안 놓습니다. 챔버 뚜껑을 닫지 마십시오.
8. 수술 1시간 후 새끼가 완전히 깨어나면 저산소증 챔버 뚜껑을 닫고 가스 수준을 줄여 저산소 상태(8% O₂ 및 92% N₂)를 설정합니다.
9. 90분 동안 저산소증을 앓고 있으면 새끼를 우리로 되돌려 보냅니다.
10. HI 뇌 손상 일주일 후 1단계를 반복합니다.
    1. 마취 후 멸균된 가위와 집게로 두피를 절개하여 우반구 후외측의 뇌 병변을 확인합니다.
       메모: 이 치료법은 새끼의 저산소증을 유발합니다. 모든 마우스에서 뇌 손상의 존재 여부와 정도는 반투명한 두개골을 통해 육안으로 육안으로 평가합니다. 변색의 크기나 부피(즉, 뇌 병변)에 따라 결정되는 바에 따라 강아지는 그룹으로 분류됩니다. 눈에 띄는 피질 손상이 없는 경우 마우스는 "피질 손상 없음" 그룹으로 분류됩니다. 눈에 띄는 피질 손상(즉, 우반구의 병변)이 있는 경우, 마우스는 "피질 손상" 그룹으로 분류됩니다. 쥐를 그룹으로 분류하는 것은 수술 일주일 후에 이루어지기 때문에 희생 시 뇌 샘플의 형태가 명확하게 정의될 때 그룹화를 수정할 수 있습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
저산소 챔버	제도바이오 & 플랜트 (Jeung Do Bio & Plant Co	실험적인 빌더
Harvard Apparatus Fluovac 마취 시스템	하버드 기구
마취 상자			아크릴 박스
프랜 리퀴드(이소플루오란)	공급자:Hana Pharm. Co., Ltd.		전신 마취제 (이소 플루란 100ml)
CD-1 마우스	공급자:Orient Co., Ltd.
블루 나일론 모노 비흡수성 봉합사 5-0 50cm	공급자:Ailee Co., Ltd.	NB 521 (NB 521

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