중추신경계 감염이 있는 쥐 모델의 생성

초록

출처: Shen, T., et al. 뎅기 바이러스 유발 급성 바이러스성 뇌염 유사 질환의 쥐 모델. J. Vis. 특급 (2019)

이 비디오는 CNS에 감염된 마우스 모델의 생성을 보여줍니다. 젖먹이 새끼는 두개골 내 및 복강 내 바이러스를 주입합니다. 바이러스가 퍼져 중추신경계를 감염시켜 신경 세포 사멸과 염증을 일으킵니다. 새끼는 질병이 진행됨에 따라 감염 증상을 평가합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 감염 절차

1. 비적응 DENV2(균주 PL046) 스톡9(원래 대만 질병통제센터에서 획득, 2.5 x 10⁷에서 1 x 10⁹ PFU/mL 범위)를 준비합니다.
2. Roswell Park Memorial Institute(RPMI) 1640 배지를 사용하여 바이러스 스톡을 1 x 10⁶ PFU로 희석하여 총 부피 40μL로 만듭니다.
3. 30G 바늘이 장착된 0.3mL 주사기 1개에 10μL(2.5 x 10^5PFU)의 희석된 바이러스를 채우고 30G 바늘이 장착된 다른 0.3mL 주사기에 30μL(7.5 x 10^5PFU)의 희석된 바이러스를 채웁니다.
4. 생후 7일 된 ICR(Institute of Cancer Research)의 젖먹이 마우스를 잡고 다음 단계를 수행합니다.
   1. 뇌내 주사의 경우, 검지와 엄지 손가락 사이의 귓바퀴를 눌러 엎드린 자세로 마우스를 잡고 시상과 양수 봉합사의 교차점 인 람다 영역에 10 μL의 희석 된 바이러스를 뇌 내로 주입합니다.
   2. 뇌내 주사 후 검지와 엄지손가락을 사용하여 마우스를 누운 자세로 잡고 30μL의 희석된 바이러스를 복강내 쥐 복부에 부드럽게 주입합니다.
      메모: 식인 풍습을 피하기 위해 75% 알코올을 사용하여 산모의 후각을 일시적으로 상실시킵니다. 또한 어미의 대변과 소변으로 새끼를 덮는 것이 좋습니다.
5. 젖먹이 생쥐를 다시 우리에 눕히고 5분 동안 기다렸다가 걷기와 모유 빨기를 포함한 생쥐의 열성으로 안전 사후 자극을 확인합니다.
   메모: 대부분의 경우 마우스는 자극 후 정상적인 활동을 보이며 기술적 도전 후에 유해한 영향은 없는 것으로 보입니다.
6. 체중(마이크로그램 저울 사용), 급성 바이러스성 뇌염 유사 질환(섹션 2에 설명된 질병 점수 기준) 및 생존율 측면에서 마우스의 일일 진행 상황을 평가합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
로스웰 파크 기념 연구소 1640 매체 (RPMI)	지브코	11875-085	바이러스 희석
0.3mL 인슐린 주사기	BD 울트라 파인 II	328838	뇌내 및 복강내 주사
마이크로 저울	메틀러 토레도의 LabX	알104	무게 마우스
비적응 DENV2(균주 PL046)	대만 질병통제센터(Centers for Disease Control of Taiwan	-	마우스 감염
암연구소(ICR) 젖먹이쥐	BioLASCO 대만 주식 회사	-	우리의 쥐 모델

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