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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. 마우스 풋 패드 마모
- C57BL/6 마우스(5-7주령)를 이소플루란 가스 마취제로 마취하고, 소형 마취 시스템(챔버)을 통해 3%의 용량으로 전달됩니다.
- 접종 전에 뒷발 패드에 등을 대고 마취 수술 평면에 마우스를 놓습니다. 다이어프램(동물의 주둥이에 맞을 만큼 충분한 크기의 슬릿)이 있는 콧방울을 마우스에 부착하고 1.5%–2.0%의 일정한 용량으로 이소플루란 가스 마취제를 투여합니다.
- 집게로 발가락을 세게 꼬집어 발생하는 고통스러운 자극에 대한 반응이 있는지 마우스가 면밀히 모니터링합니다.
- 편평한 집게로 뒷발 패드 하나를 가볍게 잡습니다.
- 뒤꿈치와 보행 패드 사이 뒷발 패드의 광택이 있는 피부를 에머리 보드(100-180방)로 약 20배 정도 부드럽게 연마합니다. 너무 자주 마모하거나 너무 많은 압력을 가하여 출혈을 유발하지 마십시오.
- 가는 집게를 사용하여 마모로 떨어져 나간 각질층을 천천히 벗겨내고 기저층을 드러냅니다.
2. PRV 발판 접종
- 2% 소 태아 혈청(FBS) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 DMEM 배지에서 원하는 역가로 희석된 바이러스 접종물을 준비합니다(재료 표).
- PK15 세포의 바이러스 스톡에 있는 플라크 형성 단위(PFU)의 수를 정량화하여 바이러스 용량을 계산 및 표준화하고 그에 따라 바이러스 접종물을 희석합니다.
메모: 이 연구에서는 PRV의 악성 균주(PRVBecker)를 8 x 106 PFU의 용량으로 사용했습니다. 이 용량은 접종된 모든 동물이 접종 후 82시간(hpi)에 임상 증상을 보이도록 하기 위해 이전 예비 실험에서 최적화되었습니다.
- 바이러스 접종물을 얼음에 묻혀 보관하고 사용하기 전에 부드럽게 섞으십시오.
- 마모된 발패드에 20μL 방울의 바이러스 접종물(8 x 106 PFU)을 추가합니다(국소 투여). 모의 접종(매체만 해당)을 병행하여 수행합니다.
- 바이러스의 흡착을 촉진하기 위해 바늘 축으로 10x 부드럽게 문지릅니다. 바늘 끝으로 긁지 마십시오. 10분마다 이 단계를 반복합니다.
- 마모된 발판이 마를 때까지 30분 동안 마우스를 마취 상태로 유지합니다.
- 마취를 중단한 후 흉골 누운 자세를 유지할 수 있을 때까지 마우스를 모니터링하고 임상 추적 및 샘플링을 위해 개별 케이지에 넣습니다.