마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염 유도

Abstract

출처: Schmitz, K., et al. 생쥐의 다발성 경화증의 EAE 모델에서 시신경염 및 뇌 염증의 생물 발광 및 근적외선 이미징. J. Vis. 특급 (2017).

이 비디오에서는 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)을 사용하여 다발성 경화증의 마우스 모델을 구축합니다. 마우스에 뉴런 펩타이드와 보조제가 포함된 에멀젼을 주입하여 자가반응성 T세포를 활성화하는 면역 반응을 유발합니다. 그 다음에는 백일해 독소(PTX)를 주입하여 혈액뇌장벽 투과성을 높여 자가반응성 T세포가 뇌에 침투할 수 있도록 합니다. 이 침투는 궁극적으로 수초성 손상을 초래하는 신호 폭포를 시작하여 다발성 경화증의 탈수초성 상태를 모방합니다.

Protocol

1. SJL/J 마우스의 EAE 유도

1. 마우스
   1. 11주 된 암컷 SJL/J 마우스를 사용하여 약 7일 동안 실험실에 적응하도록 합니다. 그룹당 n = 10개의 마우스를 사용합니다.
   2. 약물 효과를 평가하려면 면역 접종 후 3일 또는 5일부터 식수 또는 식품 펠릿을 통해 대조군에 약물과 위약을 지속적으로 투여합니다(그룹당 n = 10). 질병이 최고조에 달했을 때는 우유 또는 설탕에 3% 설탕에 담근 콘플레이크와 함께 약물이나 위약을 투여하십시오.
2. 면역 재료
   1. 완전한 프로인트 보조제(CFA, 열사된 Mycobacterium tuberculosis H37 Ra)가 포함된 에멀젼에 항원(프로테오지질 단백질의 펩타이드, PLP139-151, 1mg/mL 에멀젼)과 동결건조된 백일해 독소(PTX) 2바이알(각 5μg)로 구성된 EAE 유도 키트를 사용합니다.
   2. PTX(2μg/mL)를 1x 인산염 완충 식염수(PBS, 즉 각 PTX 튜브에 PBS 1.5mL를 첨가하고 잘 혼합한 다음 동일한 피펫 팁으로 제거하고 50mL 튜브에 PBS 1mL에 추가)에 용해시킵니다. 잘 섞습니다.
3. 예방 접종
   1. PLP/CFA를 꼬리 기저부에 각각 100μL씩 2부로 피하주사합니다.
   2. 마우스당 100μL의 PTX를 복강내(i.p.) 2회, 첫 번째는 면역 후 1-2시간, 두 번째는 24시간 후에 주입합니다.
   3. 대조군 마우스의 경우 PLP가 없는 CFA(100μL의 2인분)와 PLP가 없는 PTX를 주입합니다.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
PLP139-151/CFA 에멀젼	Hooke Labs, 매사추세츠주 세인트로렌스	EK-0123	EAE 인덕션 키트
백일해 독소	Hooke Labs, 매사추세츠주 세인트로렌스	EK-0123	EAE 인덕션 키트
IVIS 루미나 스펙트럼	Perkin Elmer, Inc., 미국 월섬		생물 발광 및 적외선 이미징 시스템
LivingImage 4.5 소프트웨어	Perkin Elmer, Inc., 미국 월섬	CLS136334	IVIS 분석 소프트웨어
이소플루란	Abbott Labs, 미국 일리노이주	26675-46-7	마 취