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방법 논문

형질전환 선충에서 프리온 유사 단백질의 세포 간 확산을 모니터링하기 위한 타임 랩스 이미징

907 조회수

⸱

2025년 7월 8일

이 논문에서

초록

출처: Nussbaum-Krammer, C. I., et al. Investigating the Spreading and Toxicity of Prion-like Proteins Using the Metazoan Model Organism C. elegans. J. Vis. 특급 (2015)

이 비디오는 적색 형광 단백질로 표지된 프리온 유사 단백질을 발현하는 예쁜꼬마선충의 생체 내 이미징 절차를 보여줍니다. 이 프로토콜은 타임 랩스 컨포칼 현미경 검사를 위해 아가로스 패드에 선충을 고정시켜 세포 내부 및 세포 간 단백질 응집 및 이동을 밝히는 것입니다. 이 기술은 neurodegenerative 질병과 관련있는 단백질 응집을 공부하기를 위해 결정적입니다.

프로토콜

1. In Vivo 타임랩스 이미징에 의한 프리온 유사 단백질의 세포 간 확산 모니터링

참고: 표준 방법에 따라 C. elegans 야생형(WT)(N2) 및 형질전환 라인을 성장시키고 재배 온도를 신중하게 제어합니다.

  1. 단량체 적색 형광 단백질(mRFP)로 태그된 프리온 유사 단백질을 발현하는 C. elegans의 형질전환 라인을 생성합니다.
  2. 표준 방법에 따라 알을 낳거나 표백하여 동기화된 개체군을 준비합니다.
    1. 알을 낳는 것에 의한 동기화
      1. 10-20 마리의 육식 성체를 접시에 옮겨 놓고 1-2 시간 동안 알을 낳게하십시오. 접시에서 성인을 제거하고 자손이 원하는 나이까지 자라게하십시오.
    2. 표백에 의한 동기화
      1. 비동기식 임신 성인 집단을 모아 알칼리성 차아염소산염 용액(250mM 수산화나트륨(NaOH) 및 상업용 표백제를 물에 1:4(v/v) 희석(H2O))하여 표백합니다. M9 완충액 (21 mM Na2HPO

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공개 사항

선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
시약
나노스피어 크기 표준 100nm써모사이언티픽3100ᅡ
레바미솔시그마L-9756
설비
Sorvall Legend XTR 냉장 원심분리기, 120VAC써모사이언티픽75004521http://www.coleparmer.com/Product/Thermo_Scientific_Sorvall_Legend_
XTR_Refrigerated_Centrifuge_120
공조/EW-17707-60
96핀 리플리케이터사이오노믹스http://www.scinomix.com/all-products/96-pin-replicator/
HiGro 고용량, 인큐베이팅 쉐이커디지랩http://www.digilabglobal.com/higro
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카탈로그 노드=83389
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스피닝 디스크 AF 컨포칼 현미경라이카http://www.leica-microsystems.com/products/light-microscopes/life-science-research/fluorescence-microscopes/details/product/leica-sd-af/
팔콘 4M60 카메라텔레다인 달사http://www.teledynedalsa.com/imaging/products/cameras/area-scan/falcon/PT-41-04M60/
소프트웨어
MetaMorph 현미경 자동화 및 이미지 분석 소프트웨어분자 장치http://www.moleculardevices.com/products/software/meta-imaging-series/metamorph.html
Hamamatsu SimplePCI 이미지 분석 소프트웨어Meyer 악기http://meyerinst.com/imaging-software/hamamatsu/index.htm
이미지J국립보건원(NIH)http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html
ImageJ용 wrMTrck 플러그인http://www.phage.dk/plugins/wrmtrck.html
C. 예쁜꼬마선충 균주
N2 (무게)Caenorhabditis Genetics Center (CGC) (Caenorhabditis Genetics Center, 카에노르하브디티스 유전학 센터)http://www.cgc.cbs.umn.edu/strain.php?id=10570

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