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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. 동물 관리
- 이 실험에는 5-6주 된 수컷 C57BL/6J 마우스(체중 20-25g)를 사용합니다.
- 생쥐를 12시간/12시간 명/암 주기로 유지하고 임의로 음식과 물을 공급받도록 합니다. 연구 전반에 걸쳐 가짜 그룹과 TBI 그룹 모두에게 동일한 양의 음식과 물을 제공합니다.
- 동물의 고통과 불편함을 최소화하기 위해 최선을 다하십시오.
2. 외상성 뇌 손상의 유도
- 마취를 위해 케타민(80-100mg/kg)/자일라진(10mg/kg) IP를 주사합니다. 눈 반사 또는 통증 반사를 사용하여 마취 깊이를 테스트합니다. 인공 눈물이나 윤활제 안연고를 사용하여 눈이 건조해지는 것을 방지하십시오.
- 마취 후 마우스를 엎드린 자세로 눕힙니다. 온도 조절 가열 패드를 사용하여 수술 중에는 37°C, TBI 후에는 30분 동안 온도를 유지하십시오.
- 절개 부위의 수염을 면도합니다.
- 3번의 번갈아 가며 스크럽을 사용하여 70% 에탄올로 두피를 소독한 다음 시상면에서 두피를 절개합니다.
- 집게를 사용하여 양쪽 절개 부위를 후퇴시키고 골막을 약간 분리합니다.
- 마커를 사용하여 정중선에서 2mm 떨어진 두개골의 오른쪽 두정엽 영역에 원(직경 3mm)을 그립니다.
- 전기 드릴로 두개골을 뚫습니다. 경막이 손상되지 않도록 이 단계를 조심스럽게 작동해야 합니다.
- 뼈 피판을 제거하고 작은 뼈 창(직경 3mm)을 노출시킵니다.
- 개두술 위에 플라스틱 부상 캐뉼러(내경 = 2.5mm, 길이 = 8mm)를 놓고 치과용 아크릴을 사용하여 캐뉼라를 두개골에 접합합니다.
- 주사기(5mL)를 사용하여 캐뉼라에 거품이 없는지 확인하기 위해 캐뉼라에 멸균 0.9% NaCl(생리식염수)을 채웁니다.
- 오실로스코프를 켜고 ampliifier를 사용하고 LFPI 장치의 고압 튜브에 기포가 없는지 확인합니다. 안정적인 신호를 제공할 때까지 약 10개의 펄스를 전달하여 장치를 테스트합니다. 진자 시작 위치의 각도를 조정하여 약 2.0기압의 펄스 강도에 도달합니다.
- 부상 캐뉼러를 LFPI 장치에 연결합니다. 방아쇠를 당기고 진자를 풀어 뇌 손상을 유도합니다. 그런 다음 펄스를 얻어 전체 밀폐된 유체 충전 튜빙 시스템을 통해 경막으로 전송합니다.
- 동일한 수술 절차로 가짜 그룹의 마우스를 수술합니다. LFPI를 수행하지 마십시오.