동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다. 
1. 마우스 모델에서 대뇌 해면상 기형 또는 CCM의 유도
<ol>
	<li>크로스 Cdh5-CreErt2; Cdh5-CreErt2로 깔짚을 생성하기 위해 Ccm2fl/fl을 가진 Ccm2 fl/fl 마우스; Ccm2fl/fl(Ccm2iECKO) 새끼 및 새끼 대조군(Ccm2fl/fl). Cdh5-CreErt2 및 Ccm2fl/fl 동물은 이전에 기술되었습니다19.</li>
	<li>4HT를 100 % 에탄올에 용해시키고 30 μL 4- 하이드 록시 타모시펜 (4HT) (농도 : 10 mg / mL)의 분취액에 -80 °C에서 보관하십시오. 사용 당일, 옥수수 기름 (0.5 mg / mL)에 묽은 분주 4HT를 희석합니다.</li>
	<li>인슐린 주사기를 사용하여 실험적 CCM 병변을 유도하기 위해 P1의 신생아 새끼에게 50μL의 4HT(0.5mg/mL)를 위강내 주</li>사합니다.
</ol>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="항상">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-하이드록시 타목시펜</td>
			<td>시그마-알드리치</td>
			<td>H6278</td>
			<td>Cdh5-CreErt2를 활성화하려면</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>옥수수 기름</td>
			<td>시그마-알드리치</td>
			<td>C8267-500ML</td>
			<td>4-하이드록시 타목시펜을 희석하기 위해</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>인슐린 주사기 </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

마우스 모델에서 대뇌 해면상 기형의 cre-loxp 매개 유도

출처: Choi, J. P., et al. <a href="https://app.jove.com/v/56476">마우스 모델에서 대뇌 해면상 기형의 유도 및 마이크로 CT 이미징.</a> J. Vis. 특급 (2017년)
이 비디오에서는 loxP 부위와 에스트로겐 수용체에 융합된 Cre 재조합효소 옆에 있는 Ccm2 유전자를 가진 유전자 변형 쥐 강아지가 뇌 해면체 기형(CCM)을 유도하는 데 사용됩니다. 4-하이드록시타목시펜의 투여는 내피 세포에서 Cre를 활성화하여 Ccm2의 결실과 뇌의 CCM 형성으로 이어집니다.

마우스 모델에서 대뇌 해면상 기형의 Cre-LoxP 매개 유도

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토에 의해 검토되었습니다.

혈관 안정성에 필수적인 CCM2 유전자를 운반하는 유전자 변형 쥐 새끼부터 시작하십시오.
이 유전자 옆에는 두 개의 loxP 부위가 있습니다. 새끼의 내피 세포는 또한 에스트로겐 수용체 또는 ER에 융합된 Cre 재조합효소를 발현합니다.
강아지에게 4-하이드록시타목시펜 또는 4-HT를 위내주사합니다.
4-HT는 내피 세포를 통해 확산되고 Cre-ER 융합 단백질의 에스트로겐 수용체 부분에 결합합니다.
이 결합은 내피 세포의 핵으로 들어가 loxP 부위에 결합하는 Cre 재조합효소를 활성화하는 형태 변화를 유발합니다.
이것은 loxP 부위 사이의 재조합 사건을 촉진하여 루프를 형성하고 CCM2 유전자 세그먼트를 절제합니다.
CCM2의 손실은 내피 세포의 무결성을 방해하여 혈관벽의 안정성을 손상시킵니다.
이로 인해 깨지기 쉽고 누출되기 쉬운 대뇌 해면체 기형 또는 CCM으로 알려진 부어오른 비정상적인 혈관 구조가 발생합니다.

4-HT를 100% 에탄올에 밀리리터당 10mg의 농도로 용해시키는 것부터 시작합니다. 30마이크로리터 분취량을 준비한 다음 섭씨 영하 80도에서 보관합니다. 사용 당일 옥수수 기름에 분취된 4-HT를 밀리리터당 0.5mg으로 희석하십시오. 그런 다음 인슐린 주사기를 사용하여 P1 신생아 새끼에게 50마이크로리터의 4-HT를 위내로 주사하여 실험적 CCM 병변을 유도합니다.

cre-loxp-mediated-induction-cerebral-cavernous-malformations-mouse

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연구

JoVE Encyclopedia of Experiments

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신경병리학

Cerebrovascular Diseases

뇌혈관 질환

Cre-LoxP Mediated Induction of Cerebral Cavernous Malformations in a Mouse Model

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마우스 모델에서 대뇌 해면상 기형의 Cre-LoxP 매개 유도

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4-하이드록시 타목시펜	시그마-알드리치	H6278	Cdh5-CreErt2를 활성화하려면
옥수수 기름	시그마-알드리치	C8267-500ML	4-하이드록시 타목시펜을 희석하기 위해
인슐린 주사기