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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. 마취 유도
- 복강내로 주사한 케타민(125mg/kg)과 자일라진(10mg/kg)으로 마우스를 마취합니다.
2. 15분마다 바이탈 사인 모니터링
- 체온, 호흡수, 피부색을 모니터링합니다. 마우스는 만졌을 때 따뜻해야 합니다. 피부가 분홍색으로 보이고 잘 관류되어야 합니다. 호흡수는 분당 50-70회 범위여야 합니다.
3. 수술 전 절차
- 부상 유도 전날에 모든 마우스의 무게를 측정합니다.
- 각 실험 대상에 대해 고압멸균으로 한 세트의 수술 기구를 멸균합니다. 사용하기 전에 충격을 가하는 장치를 소독하십시오.
- "낮음" 설정으로 설정된 전기 가열 패드 위에 깨끗한 케이지를 놓고 마우스가 보행 후 열에서 멀어질 수 있는 방식으로 배치하여 복구 케이지를 준비합니다.
- 멸균된 층류 후드 내에 수술실을 설치합니다.
- 입체식 작동 프레임을 배치합니다.
- 충격을 가하는 장치를 입체 프레임에 부착합니다.
- 속도 및 체류 시간에 대해 원하는 생체 역학적 매개변수로 작동 장치를 설정합니다.
메모: 이 프로토콜에서는 속도가 2.5m/s로 설정되고 체류 시간이 0.1초인 5mm 직경의 두개골 절제술을 통해 3mm 직경의 충격 팁을 사용하여 심각한 뇌 손상을 설명합니다. TBI의 전체 스펙트럼을 유도하기 위해 광범위한 생체 역학적 매개변수를 사용할 수 있습니다.
- 새 개인 보호 장비와 멸균 장갑을 착용하십시오.
- 전기 이발기를 사용하여 수술 부위의 털을 면도합니다.
- 각막 손상과 건조를 방지하기 위해 마우스의 눈에 보호용 안과 연고를 바르십시오.
- 마우스를 수술실에 놓습니다.
- 요오드 기반 수술용 스크럽과 알코올을 3회 번갈아 가며 사용하여 피부를 준비합니다.
4. 통제된 피질 충격의 적용
두개골- 이 드러나는 메스로 두피를 정중선에서 1cm 절개합니다.
- 소형 이어바 사이에 양측 측두골을 고정하고 앞니 클램프 내에 앞니를 고정하여 마우스 머리에 안정적인 3점 홀드를 만들어 입체 작동 프레임 내에 마우스를 배치합니다.
두개골 절- 제술 중 두피가 드릴 비트에 닿지 않도록 지혈 또는 잠금 겸자로 두피를 수술 부위에서 멀리 집어넣습니다.
- 노출된 두개골의 시상 봉합사와 관상 봉합사를 확인합니다.
메모: 이 프로토콜은 두개골 절제술을 시상 봉합선에서 2mm 왼쪽, 2mm 좌측 관상동 봉합선의 중앙에 배치합니다.
- 트레핀 드릴 비트가 있는 드릴을 사용하여 두개골 절제술을 수행합니다.
- 두개골 절제술을 수행하려면 먼저 최대 속도로 드릴을 작동시킨 다음 두개골 절제술 부위의 두개골에 수직으로 트레핀 드릴 비트를 적용합니다.
- 두개골에 접촉이 이루어지면 드릴에 부드럽고 균일한 압력을 가합니다. 드릴이 두개골을 관통하면 약간의 "주기"가 느껴질 것입니다. 아래에 있는 dura.
를 관통하지 마십시오.
메모: 이 프로토콜은 5mm 트레핀 드릴 비트를 사용하여 두개골 절제술을 수행합니다.
- 집게와 작은 게이지 피하 주사 바늘을 사용하여 뼈 피판을 제거하고 아래에 있는 경막을 완전히 노출시킵니다.
- 임팩터 팁을 작동 필드로 회전하고 노출된 경막과 접촉할 때까지 내립니다. 접촉이 이루어지면 기기의 접촉 센서가 신호음을 울려 외과의에게 접촉이 이루어졌음을 알립니다. 이렇게 하면 변형 깊이가 설정되는 영점이 표시됩니다.
메모: 이 프로토콜은 3mm 임팩트 팁을 사용하여 심각한 부상을 발생시킵니다. 1mm 정도의 작은 팁을 사용하여 더 국소적인 부상을 적용할 수 있습니다.
- 임팩트 팁을 집어넣고 입체성 프레임에서 임팩터 위치를 낮춰 원하는 임팩트 깊이를 설정합니다.
메모: 이 프로토콜에서는 변형 깊이를 2mm로 설정하여 심각한 부상을 설명합니다.
- 작동 장치에서 임팩터를 작동하여 부상을 입힙니다.
- 임팩트 장치를 필드 밖으로 돌리고 입체 프레임에서 동물을 제거합니다.
5. 수술 부위 폐쇄
- 두개골과 손상된 피질 표면의 출혈을 멸균 면 팁 어플리케이터의 직접적인 압력으로 제어합니다.
- 멸균 면 팁 어플리케이터로 두개골을 말리십시오.
- 시중에서 판매되는 수술용 접착제 또는 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 두개골 절제술 위의 두피를 닫습니다.
메모: 이 프로토콜에서는 수의학 수술용 접착제를 사용하여 두피를 봉합합니다. 뼈 피판은 교체되지 않고 폐기됩니다.
6. 수술 후 관리 및 모니터링
- 수술 후 진통제를 투여합니다(예: 서방형 부프레노르핀 0.1–0.5mg/kg 피하 투여, 72시간 동안 지속적인 진통제를 제공).
- 동물을 깨끗하고 예열된 케이지에 측면 욕창 회복 위치에 놓습니다.
- 깨어나서 움직일 수 있을 때까지 동물들을 관찰한 다음 각 쥐를 집 우리로 되돌려 놓습니다.
- 음식과 물에 대한 자유로운 접근을 보장합니다. 정상적인 음식과 물 섭취는 일반적으로 부상 후 1-2시간 이내에 재개됩니다.
- 실험 내내 3일마다 체중을 측정합니다.