혈관내 천공을 통한 마우스 모델에서 지주막하 출혈 유도(Induction of a arachnoid hemorrhage in a Mouse Model through endovascular perforation)

초록

출처: Liu, S., et al. 지주막하 출혈에 대한 혈관 내 천공 모델과 자기 공명 영상(MRI)을 결합했습니다.J. Vis. 특급 (2021).

이 비디오는 마우스 모델에서 혈관 내 천공을 통한 지주막하 출혈의 유도를 보여줍니다. 마취된 마우스의 목 부위를 절개하여 총경동맥과 그 분기점에 접근합니다. 동맥을 통해 필라멘트를 삽입하여 두개내 동맥 가지를 천공하여 지주막하 출혈을 유발합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 동물 준비

1. 케타민(70mg/kg)과 자일라진(16mg/kg)을 복강내로 주사하여 마취를 유도합니다. 정상적인 체온을 유지하여 깊은 마취를 빠르게 유도하는 데 기여합니다. 발가락 꼬집음과 같은 통증 자극으로 적절한 진정 효과를 테스트하고 반응이 없는지 확인합니다.
2. 면도기로 마우스의 목털을 조심스럽게 면도하고 70% 에탄올과 베타딘/클로르헥시딘으로 닦고 피부 표면에 1% 리도카인을 바르면 국소 통증 조절이 가능합니다.
3. 마우스를 누운 위치에 놓습니다. 테이프를 사용하여 팔다리와 꼬리를 고정하고 목 피부를 수술 반대쪽으로 부드럽게 늘립니다. 동시에 목을 약간 들어 올립니다.
4. 안과 연고(예: 덱스판테놀 5%)를 사용하여 수술 중 눈의 탈수를 예방하십시오.

2. SAH 유도

1. 멸균 메스로 턱에서 가슴뼈 위쪽 가장자리(1.5cm)까지 목 피부를 열고 주변 결합 조직과 침샘을 뭉툭하게 분리합니다.
2. 기관의 한쪽(이 경우 오른쪽)을 따라 근육군을 분리하여 영양이 풍부한 혈관과 정맥으로 덮인 총경동맥(CCA) 수초를 노출시킵니다. CCA와 신경은 서로 가까이 위치해 있습니다.
3. CCA를 분리하고 무료 8-0을 남겨둡니다. CCA를 미리 결찰하지 않고 CCA 주위의 실크 봉합사. 미주신경은 쉽게 손상되므로 보호에 주의하십시오(그림 1A).
4. CCA, 내부 경동맥(ICA) 및 외부 경동맥(ECA)의 삼중 분기는 이완의 아래쪽 뒤쪽 3분의 1을 따라 볼 수 있습니다. ECA의 말단부를 절개하고 혈관을 가능한 한 원위부로 두 배 멀리 접합합니다.
5. 두 번 결찰된 세그먼트의 중간 지점에서 ECA를 분리하여 혈관 그루터기를 만듭니다.
6. ECA 그루터기 주변의 필라멘트에 대해 하나의 결찰을 미리 정렬하고 필라멘트가 성공적으로 삽입될 때까지 닫지 마십시오.
7. 봉합사 또는 마이크로 클립을 사용하여 ICA 및 CCA를 일시적으로 폐색합니다(그림 1B).
8. 미세혈관 가위를 사용하여 ECA를 작게 절개합니다(ECA 직경의 약 절반). 5-0(또는 4-0) 프롤렌 필라멘트를 ECA에 삽입하고 CCA로 진행합니다.
9. ICA 및 CCA의 마이크로 클립을 느슨하게 하면서 ECA의 합자를 약간 닫습니다(그림 1C).
10. 필라멘트를 부드럽게 뒤로 당기고 ECA 그루터기를 두개골 방향으로 조정하여 분기점을 통해 필라멘트를 ICA로 침입합니다(그림 1D).
11. 필라멘트 팁을 기관 정중선에 대해 ~30°, 수평면에 대해 ~30° 각도로 중앙을 가리킵니다. ICA 내부에서 필라멘트를 앞으로 밉니다. 전대뇌동맥(ACA)-중대뇌동맥(MCA) 분기점에 도달한 후 저항이 발생합니다(~9mm).
12. 필라멘트를 3mm 더 전진시켜 올바른 ACA에 구멍을 뚫습니다. 필라멘트를 ECA 그루터기로 즉시 빼내어 지주막하 공간으로 혈류가 흐르도록 합니다.
13. 필라멘트를 이 위치에 약 10초 동안 유지합니다(그림 1E). 근육 떨림, 동측 경작, 헐떡임, 심장 박동 변화, 요실금 등의 증상은 성공적인 수술의 증거가 될 수 있습니다.
14. 과도한 출혈을 방지하기 위해 CCA를 일시적으로 닫으십시오. 필라멘트를 즉시 빼내고 미리 준비된 봉합사로 ECA를 접합합니다. CCA를 다시 열고 지주막하 공간으로 혈액을 재관류하고 더 나아가 삼출할 수 있도록 합니다(그림 1F).
15. 출혈 누출을 확인한 후, 수술 후 피부 감염을 예방하기 위해 상처 주위의 피부를 소독하고, 흡수성이 없는 4-0 폴리에스테르 섬유 봉합사로 상처를 봉합합니다.
16. 의식을 되찾을 때까지 마우스를 보온 상자에 넣습니다. 동물이 완전히 깨어날 때까지 기다렸다가 흉골 누운 상태를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복했는지 확인하십시오. 완전히 회복될 때까지 동물을 다른 쥐와 함께 돌려보내지 마십시오.
17. 수술 후 통증 완화를 위해 체중 200-300mg/kg의 파라세타몰을 투여합니다.
18. 수술 후 매일 생쥐를 확인하십시오.

결과

그림 1: 수술 기법의 단계별 이미지.(A) 노출된 우측 경동맥 해부학적 구조: CCA와 ICA 및 ECA로의 분기점, ECA의 작은 가지(OA 및 STA)가 식별됩니다. (B) ECA는 주변 조직에서 동원되고 절단하기 전에 두 개의 봉합사로 결찰됩니다. 세 번째 결찰은 분기점을 가리지 않고 분기점 근처에 느슨하게 배치해야 합니다. (C) ICA를 조심스럽게 절개할 때 과도한 출혈을 방지하기 위해 ICA 및 CCA를 임시로(결찰 또는 클립으로) 폐색합니다. (D) 필라멘트가 ECA에 삽입되고 CCA로 전진합니다. 사전 조정된 결찰은 혈액 삼출이 발생하지 않도록 조심스럽게 조여야 하지만 필라멘트의 전진...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
아이크림	바이엘	815529836	비판텐
결찰 봉합사 (5-0)	에스엠아이		실크 블랙 USP
현미경용 광원	자이스	CL 6000 LED
케타민	CP-제약	797-037	100 마그네슘 / mL
파라세타몰 (40 mg/mL)	베네 Arzneimittel	4993736
프롤렌 필라멘트(5-0)	에르히콘	EH7255
면도기	웰라	HS61
수술 기구(가위)	증권 시세	14060-09
수술 기구(겸자#1)	에스큘랩	FM001R
수술 기구(겸자#2)	에스큘랩	FD2855R
수술 기구(겸자#3)	함마허	HCS 082-12
수술 기구(바늘 홀더)	증권 시세	91201-13
수술 기구(Vannas Spring Scissors)	증권 시세	15000-08
수술용 현미경	자이스	스테미 2000 C
상처봉합사(4-0)	에르히콘	CB84D
자일라벳	CP-제약	797-062	20 mg/mL

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