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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. 흉부 편절개 수술
- 수술을 위한 무균 환경을 유지하기 위해 적절한 보호 장비(장갑, 마스크, 가운)를 착용하십시오. 알코올 물티슈로 수술 부위를 청소하고 수술 부위에 멸균 수술용 드레이프를 놓습니다. 수술 도구를 살균하고 수술 부위에 놓습니다.
- 이소 플루란 가스 (3 % 유도, 0.5-3 % 유지 보수)와 산소 (1 L / min)의 혼합물로 쥐를 마취합니다. 발가락 꼬집음 및 각막 반사 반응이 없는지 확인하여 적절한 수술 마취 깊이를 확인합니다. 전체 절차 동안 랫트를 지속적으로 모니터링하고 외과적 마취 깊이를 유지하기 위해 필요에 따라 마취 전달량을 조정합니다.
- 엉덩이와 목 사이의 등쪽 몸통을 면도하고, 쥐를 수술 부위에 놓고, 알코올 물티슈와 프로요오드 용액으로 절개 부위를 소독하고, 직장 체온계로 모니터링되는 피드백 제어 발열 패드를 사용하여 심부 체온을 37°C로 유지합니다.
- 눈에 안과 연고를 바르면 눈의 수분을 유지하고 필요에 따라 수술 내내 다시 바르십시오.
- 메스로 T6-T10 척추를 덮고 피부를 2.5cm 절개합니다. 무딘 해부 가위를 사용하여 피부와 표재성 지방을 수축시킵니다.
참고: T6-T10 척추 분절은 2nd 흉추의 눈에 띄는 돌기에서 시작하여 두개골 기저부에서 등쪽 척추 분절을 부드럽게 촉진하거나 13번째 흉추의 움직임을 유도하는 가장 뒤쪽에 떠 있는 갈비뼈의 촉진에 의해 꼬리 방향으로 식별할 수 있습니다.
- T7-T9 척추의 등쪽 쪽에 삽입하는 척추주위 근육을 둔기 해부 가위와 자체 유지 견인기를 사용하여 분리합니다. 미세한 집게와 솜 끝이 있는 어플리케이터를 사용하여 남아 있는 조직을 분리하고 제거하여 가시돌기와 척추 층을 노출시킵니다.
참고: 이 단계와 다음 단계는 현미경 시각화(~5−15x)에 의해 크게 도움이 됩니다.
- 섬세한 뼈 트리머로 T7 및 T8 척추의 패싯(zygapophysial joints)을 양측으로 조심스럽게 자릅니다. T8과 T9 척추 얇은 판 사이의 등쪽 결합 조직을 메스(1mm 깊이)로 표면적으로 자르고 밑에 있는 탯줄을 다치지 않도록 주의합니다.
- 뼈 트리머로 T8 척추의 가시돌기를 제거합니다. 구부러진 지혈 겸자를 T7 가시돌기에 조심스럽게 고정한 상태에서 T8 층의 꼬리 끝을 약간 좌측으로(~20°) 회전하고 T8 층판 아래에 뼈 트리머를 삽입하고 층을 따라 연장하는 정중선을 절단합니다. 척수를 노출시키기 위해 척추 층의 내측 판막의 왼쪽과 오른쪽에 있는 절단을 반복하여 후판 절제술을 계속합니다.
참고: 후판 절제술에서 생성된 모든 뼈 조각을 제거하도록 주의하십시오.
- 노출된 척추관에 리도카인(2%, 0.1mL)을 떨어뜨리고 가는 집게와 홍채 절제술 가위를 사용하여 T8 척추 분절에 겹쳐진 경막을 제거합니다. 노출된 탯줄에 리도카인 투여를 반복하고 노출된 T7-T9 척추 사이를 뻗어 있는 가시돌기 사이에 생성된 중심선을 시각화하여 탯줄의 정중선을 식별합니다.
참고: T7 및 T9의 가시돌기와 함께 T8에 노출된 등뿌리 신경절도 정중선 식별을 돕는 데 사용할 수 있습니다. 30G 바늘을 탯줄 정중선에 삽입하여 후속 반쪽 절개를 도울 수 있습니다.
- 해부 칼로 정중선에서 한쪽으로 척수를 반절부합니다. 복부 쪽의 전방 척추 동맥을 절단하지 않도록 주의하십시오(척추체에 강한 압력을 가하지 마십시오). 홍채 절제술 가위를 사용하여 척수의 병변이 있는 쪽에 남아 있는 조직을 조심스럽게 잘라내어 복측 사분면이 적절하게 절제되었는지 확인합니다.
- 척수 위의 노출된 구멍에 멸균 식염수에 적신 무균 지혈 스폰지(~6 x 2mm)를 놓고 근육층(4-0 polyglactin 910)을 봉합합니다. 다음으로 절개 부위 주위의 피부를 봉합합니다.
- 수술 직후 적절한 진통제(부프레노르핀 0.05mg/kg 피하[s.c.]), 항생제(엔로플록사신, 10mg/kg s.c.)를 투여하고 손실된 체액을 5cc 젖산 링거 용액(복강내 [i.p.])으로 보충합니다.
- 쥐를 마취에서 제거하십시오. 동물이 완전히 깨어날 때까지 쥐를 가열 패드 또는 램프 (~ 33 ° C) 아래의 따뜻한 환경에 놓습니다.
- 수술 후 첫 3일 동안 매일 추가 진통제를 제공하고 통증, 체중 감소, 부적절한 배뇨, 감염, 상처 치유 문제 또는 자가포식의 징후를 지속적으로 모니터링합니다.