신경 펩티드 수용체 작용제를 이용한 등쪽 뿌리 신경절 감각 뉴런의 자극

초록

출처: Lin, Y., et al., Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release. J. Vis. 특급 (2018)

이 비디오는 형질주입된 등뿌리 신경절 세포를 사용하여 신경펩타이드 수용체 작용제로 신경전달물질 방출을 자극하여 신경전달물질 방출을 연구하는 방법을 보여줍니다.

프로토콜

1. 1차 DRG 세포에서 신경전달물질 방출

1. 6일차에 세포를 도말한 후(siRNA 형질주입 후 72시간), 배양 배지를 200μL 무혈청 배지로 변경하고 37°C CO₂ 인큐베이터에서 30분 동안 세포를 배양합니다.
2. 1 μL 자극 화학물질을 추가하고 피펫팅으로 배지를 부드럽게 혼합합니다. 지정된 시간 동안 37°C CO₂ 인큐베이터에서 접시를 배양합니다.
   메모: 이 기사에서는 배양된 세포를 NPFFR2 작용제인 dNPA(D.Asn-Pro-(N-Me)Ala-Phe-Leu-Phe-Gln-Pro-Gln-Pro-Gln-Arg-Phe-NH2, 5 nmol)로 1시간 동안 자극했습니다.
3. 배양 접시와 원심 분리기에서 배양 배지를 5,000 x g에서 4 ° C에서 5 분 동안 회수하여 부유 불순물을 제거합니다.
4. 원심분리에서 상층액을 수집하고 필요에 따라 인산염 완충 식염수(PBS)로 샘플을 희석합니다. 그런 다음 효소 면역분석법(EIA) 키트를 사용하여 신경전달물질 수치를 분석합니다.
   메모: 여기서, CGRP 수준을 분석하기 전에 상등액을 1:100으로 희석했습니다. SP 수준을 분석하기 전에 상층액을 희석하지 않았습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
DMEM-F12	인비트로젠	12400024	문화 매체
행크의 균형 잡힌 소금 용액	인비트로젠	14170-112	문화 매체
파스퇴르 피펫	힐겐베르크	3150102	세포 분쇄
dNPA	게네메드 합성	해당 없음	NPFFR2 작용제