반파킨슨병 쥐의 운동 기능 평가를 위한 계단 테스트

초록

출처: Rattka, M, et al., A novel approach to assess motor outcome of deep brain stimulation effects in the hemiparkinsonian rat: Staircase and cylinder test. J. vis. Exp. (2016).

이 비디오는 우뇌 병변이 있는 반파킨슨병 쥐의 운동 기능을 평가하기 위한 계단 테스트를 보여줍니다. 병변은 도파민 신호 전달을 방해하여 왼쪽 발 조절을 손상시켜 왼쪽 계단에 더 많은 펠릿이 남아 운동 기능 장애를 나타냅니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 계단 테스트(그림 1)

1. 획득 단계
   1. 훈련 하루 전, 동물들이 계단 테스트에 사용된 펠릿에 익숙해지도록 합니다.
      1. 선택 사항 : 동물의 동기 부여를 높이려면식이 제한 (체중을 무료 급여 수준의 90 %로 유지하기 위해 표준 실험실 차우 10-15g)을 사용하십시오. 그러나 이것이 긍정적인 훈련 효과를 얻기 위해 반드시 필요한 것은 아닙니다. 본 연구는 식품 제한 없이 진행되었습니다.
   2. 투명한 플라스틱 유리 계단 상자(높이: 34.5cm, 길이: 35.5cm, 너비: 12cm, 좁은 수납공간 6cm)를 0.1% 아세트산 용액으로 상자를 청소하여 준비합니다. 참고: 계단 상자는 높은 플랫폼과 좁은 구획에 두 개의 계단이 있는 두 개의 구획 상자입니다. 좁은 칸막이의 계단에서 왼쪽 계단은 왼쪽 발로, 오른쪽 계단은 오른쪽 발로만 갈 수 있습니다.
      참고: 표준 계단 상자는 뚜껑이 있는 두 개의 구획으로 구성됩니다. 케이블을 통해 자극된 쥐를 사용한 실험에 사용하려면 뚜껑이 없는 높은 상자를 사용하십시오.
   3. 계단을 제거하고 각 단계의 우물을 8 개의 45mg 펠릿으로 채 웁니다.
   4. 계단을 삽입하고 높은 플랫폼에 펠릿 8개를 추가로 놓습니다.
   5. 쥐를 운송 상자에 넣으십시오.
   6. 운송 상자를 사용하여 가정용 케이지에서 계단 상자로 쥐를 운반하십시오.
   7. 쥐를 계단 상자에 넣습니다(그림 2).
   8. 5분 후, 계단 상자에서 동물을 꺼내 운송 상자를 사용하여 가정용 케이지에 다시 넣습니다.
   9. 플랫폼에서 그리고 (결국) 오른쪽과 왼쪽 계단에서 얼마나 많은 펠릿을 먹었는지 주목하십시오.
   10. 각 단계의 우물에 45mg 펠릿 8개를 채워 계단을 다시 채웁니다.
   11. 0.1% 아세트산 용액으로 계단 상자를 청소하고 플랫폼에 추가 펠릿을 놓습니다.
   12. 이 절차(획득 단계)를 3일 연속으로 반복합니다.
       참고: 설명된 모든 실험은 수컷 Sprague Dawley 쥐를 대상으로 수행되었습니다. 다른 훈련 모듈의 기간은 다른 균주, 성별 및 벤더의 쥐에서 다를 수 있습니다.
2. 자유 선택 테스트
   1. 0.1% 아세트산 용액으로 계단 상자를 청소합니다.
   2. 계단을 제거하고 각 단계의 우물을 8 개의 45mg 펠릿으로 채 웁니다.
   3. 쥐를 운송 상자에 넣으십시오.
   4. 운송 상자를 사용하여 가정용 케이지에서 계단 상자로 쥐를 운반하십시오.
   5. 쥐를 계단 상자에 넣으십시오.
   6. 5분 후, 계단 상자에서 동물을 꺼내 운송 상자를 사용하여 가정용 케이지에 다시 넣습니다. 위치
      오른쪽과 왼쪽 계단에서 얼마나 많은 펠릿을 먹었는지 주목하십시오.
   7. 참고: 동물들이 여전히 펠릿을 잡는 데 문제가 있다면, 쉽게 접근할 수 있는 플랫폼에 좀 더 추가하세요.
   8. 각 단계의 우물에 45mg 펠릿 8개를 채워 계단을 다시 채웁니다.
   9. 다음 동물을 위해 0.1% 아세트산 용액으로 계단 상자를 청소하십시오.
   10. 이 절차(자유 선택 단계)를 3일 연속으로 반복합니다.
       참고: 제시된 결과는 모듈 사이에 휴식 시간 없이 수행된 교육을 통해 얻은 것입니다. 일부 그룹은 교육 과정을 지원하기 위해 통합을 위해 휴식일을 선호합니다.
3. 강제 선택 테스트
   1. 0.1% 아세트산 용액으로 계단 상자를 청소합니다.
   2. 계단을 제거하고 왼쪽 계단의 각 단계에 있는 우물을 8개(모듈의 처음 3일) 또는 4개(모듈의 연속 3일)의 45mg 펠릿으로 채웁니다.
      1. 손상이 발생하는 측면에서 강제 선택 테스트를 수행합니다.
         참고: 우리는 파킨슨병 병변을 우반구에서 수행하므로 왼쪽 발을 선택적으로 훈련합니다.
   3. 쥐를 운송 상자에 넣으십시오.
   4. 운송 상자를 사용하여 가정용 케이지에서 계단 상자로 쥐를 운반하십시오.
   5. 쥐를 계단 상자에 넣으십시오.
   6. 5분 후, 계단 상자에서 동물을 꺼내 운송 상자를 사용하여 가정용 케이지에 다시 넣습니다.
   7. 왼쪽 계단에서 얼마나 많은 펠릿을 먹었는지 주목하십시오.
   8. 각 단계의 우물을 8개 또는 4개의 45mg 펠릿으로 채워 계단을 다시 채웁니다(펠릿의 수는 훈련일에 따라 다름).
   9. 다음 동물을 위해 0.1% 아세트산 용액으로 계단 상자를 청소하십시오.
   10. 이 절차(강제 선택 단계)를 6일 연속으로 반복합니다.
4. 데이터 수집
   1. 강제 선택 모듈(왼쪽 계단의 각 우물에 있는 4개의 펠릿)에 대해 설명된 대로 이틀 연속으로 실험을 수행합니다. 성공률(먹은 펠릿 수)을 이틀의 평균으로 계산합니다.

결과

그림 1: 계단 테스트 설정. 왼쪽 계단에 펠릿이 배치된 계단 상자. (A) 측면도, (B) 위에서 본 모습.

그림 2: 계단 테스트. 계단 테스트 중 hemiparkinsonian 쥐.

(참고: 이미지에서 그림 5 텍스트를 자릅니다)

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
뚜껑이 없는 계단 상자	글라스 카일, 독일		맞춤 제작
먼지가 없는 정밀 펠릿, 45 mg	바이오 서비스	F0021