Angiotensin II-Induced Hypertension Mouse Model에서 신장 동맥의 교감신경 탈신경

초록

출처: Wang, M., et al., 안지오텐신 II 주입으로 유발된 고혈압 완화 개선. J. Vis. 특급 (2022)

이 비디오는 안지오텐신 II 유도 고혈압 마우스 모델에서 교감신경 기능을 방해하고 혈압을 낮추기 위해 페놀이 사용하는 신장 동맥 교감신경 탈신경 절차를 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 양측 신신경탈

1. Ang II 주입 1주일 후 혈압(BP)이 ≥140/90mmHg 상승하거나 수축기 혈압/이완기 혈압이 25% 증가한 마우스를 선택합니다.
2. 수술 전 동물의 체중을 기록하고 신장 탈신경 수술을 위해 최소 체중이 24g인 동물을 선택하십시오.
3. 펜토바르비탈나트륨을 사용하여 마우스를 마취합니다. 부정적인 발가락 핀치 반사로 마취 깊이를 확인합니다.
4. 면도기로 복부의 털을 제거합니다. 외과적 오염을 방지하기 위해 이 절차를 신중하고 철저하게 수행하십시오.
5. 생쥐를 수술대에 놓고 복부를 위로 올리고 팔다리를 테이프로 고정합니다. 포비돈 요오드로 복부 피부를 소독한 다음 70% 에탄올로 세 번 닦습니다.
6. 메스 날을 사용하여 2cm 복부 정중선 복부 절개를 만듭니다. 37°C의 식염수에 적신 거즈로 장을 당겨 좌측 신동맥을 드러냅니다. 구부러진 핀셋을 사용하여 신장 동맥에서 지방을 조심스럽지만 무뚝뚝하게 절개합니다. (그림 1A-C).
7. 멸균되고 날카로운 가위로 계량지를 신장 동맥과 같은 크기의 직사각형으로 자릅니다. 참고로 계량 용지를 그림 1C의 점선과 동일한 크기로 자릅니다.
   참고: 같은 모양을 유지하기 위해 한 번에 여러 조각의 계량지를 자르는 것은 수술의 중요한 부분입니다.
8. 계량 용지를 10% 페놀/에탄올 용액에 최소 30초 동안 담그십시오. 좌측 신장 동맥의 표면을 덮고 혈관을 계량지로 감싸고 2분 동안 유지합니다(그림 1D). 거즈를 사용하여 주변 조직을 보호하여 계량지가 주변 신장과 장에 닿지 않도록 합니다.
   참고: 페놀 용액은 플라스틱 튜브에서는 안정적이지만 유리 바이알에서는 안정적이지 않습니다. 따라서 용액은 모든 실험에 대해 새로 준비해야 합니다.
9. 오른쪽 신장 동맥에 대해서도 동일한 절차를 수행합니다. 식염수에 잠긴 계량지로 가짜 수술을 수행합니다.
10. 근육을 초기 위치로 재배치하고 중단된 봉합사에서 6-0 Vicryl 봉합사로 복막을 닫습니다. 그런 다음 중단된 4-0 나일론 봉합사로 피부를 닫습니다. 완전히 회복될 때까지 모든 마우스를 모니터링합니다.

2. 수술 후 관리

1. 절개 부위에 포비돈 요오드를 바르고 회복 및 수술 후 모니터링을 위해 동물을 따뜻하게 한 전기 담요에 넣습니다.
2. 하루에 두 번 쥐를 모니터링하여 발적, 부기, 통증 또는 복부 감염을 평가합니다. RDN 시술 약 1시간 전과 24시간 후에 모든 마우스에 meloxicam(0.5mg/kg, SC)을 제공합니다.

결과

그림 1: 계량지를 사용한 RDN 절차. (A,B) C57BL/6 (ex vivo) 마우스의 신장 동맥 해부학적 이미지. (C) 두 개의 점선 안에 있는 부분은 계량 용지로 덮인 영역을 나타냅니다. (D) 양측 신장 동맥의 표면을 10% 페놀/에탄올 용액에 담근 적절한 계량 종이로 덮습니다. 점선을 넘어 여과지를 덮지 마십시오. *는 계량 용지를 나타냅니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
안지오텐신 II	상곤바이오텍	CAS:4474-91-3	고혈압 애니몰 모델을 만들려면
혈압 분석	비지테크 시스템	BP-2000	생쥐의 혈압 측정
미니 삼투압 펌프	듀렉트 코퍼레이션	CA 95014	안지오텐신 II로 채우려면
계량 용지	상곤바이오텍	F512112	페놀이 침지 된 계량 종이로 신장 신경을 파괴하기 위해; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.