쥐 뇌 절편에서 RNA 발현을 연구하기 위해 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용한 현장 혼성화

초록

출처: Shokry, I. M., et al. 세로토닌 증후군을 앓고 있는 쥐의 파라포름알데히드 접두사 뇌에 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용한 빠른 In Situ 혼성화. J. Vis. 특급 (2015).

이 비디오는 세로토닌 증후군의 영향을 받는 쥐의 뇌 조직에서 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여 세로토닌 수용체 RNA 합성을 감지하는 방법을 보여줍니다. 이 프로토콜에는 조직 전처리, 프로브 혼성화 및 효소 검출이 포함되어 현미경으로 세로토닌 수용체 RNA 발현을 시각화하고 정량화합니다.

프로토콜

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토 위원회에 의해 검토되고 승인되었습니다.

1. 준비

1. 조직 준비 및 절편
   1. 쥐를 신선/식염수(SAL, 0.9% NaCl), 접두사/SAL 및 접두사/3,4-메틸렌디옥시메스암페타민(MDMA, 표 1의 세부 정보 참조)의 세 그룹으로 무작위로 할당합니다.
   2. 2시간 간격으로 SAL 및 MDMA 그룹에 각각 1ml/kg SAL 및 10mg/kg MDMA를 복강내로 3회 투여합니다. 동물이 6일 동안 치료에서 살아남을 수 있도록 합니다.
   3. 7일째에 5mg/kg 자일라진을 복강내로 조합하여 100mg/kg 케타민을 쥐에게 투여하여 깊은 마취(즉, 각막 깜박임 및 꼬리 꼬집 반사 상실)
   를 합니다.
   4. 신선/SAL 그룹의 경우 신선한 뇌 검사를 위해 쥐의 목을 빠르게 자르고 뇌를 제거합니다.
   5. 접두사/SAL 및 접두사/MDMA 그룹의 경우 흉골을 따라 약 10-12cm 정도 절단한 다음 흉골 끝을 노출시킵니다.
   6. 지혈로 흉골 끝을 잡고 날카로운 가위로 횡격막을 양쪽 측면으로 자른 다음 갈비뼈를 가로질러 위....

결과

표 1. 실험 설계

<.......

	신선한	파라포름알데히드 접두사a
	샐b	SALb	MDMAc
대상 프로브 (htr2a)	√	√	√
포지티브 프로브 (ppiB)	–	√	√

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
RNAscope 음성 대조군 프로브-DapB	고급 세포 진단, INC	310098
RNAscope 전처리 4	고급 세포 진단, INC	320046
RNAscope 2.0 HD 시약 키트 - 빨간색	고급 세포 진단, INC	310036
RNAscope 프로브 - Rn-PPIB	고급 세포 진단, INC	313921
쥐 Htr2a	고급 세포 진단, INC	300031
크라이오스타트	라이카	CM 1850
수평 셰이커	폭스바운드	88032-088
혼성화 오븐	써모 피셔 사이언티픽	222000
Superfrost Plus 현미경 슬라이드	피셔 사이언티픽	12-550-15
소수성 펜	벡터	H-4000
현미경	올림푸스	프로비스 AX70