쥐의 청각 피질 제거를 위한 정위 유도 절제 기법(A Stereotactically Guided Ablation Technology for Auditory Cortex removal in Rats)

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 쥐의 준비

참고: 호르몬 변화를 피하기 위해 수컷 쥐를 대상으로 실험을 수행했습니다.

1. 근육 주사로 케타민 염산염(30mg/kg)과 자일라진 염산염(5mg/kg)의 혼합물을 사용하여 동물을 마취합니다. 이 용량으로 쥐는 약 1시간 동안 깊이 마취되어야 합니다.
2. 쥐의 발가락을 꼬집으십시오. 금단 반사가 없다는 것은 동물이 완전히 의식을 잃었다는 것을 나타냅니다. 쥐가 꼬집음에 반응하면 초기 용량의 1/3로 추가 마취를 제공합니다.
3. 두피를 면도하고 포비돈 요오드로 수술 부위를 소독한다.
4. 동물을 가열 패드에 올려 38°C의 온도를 유지하고 두 개의 이어바와 바이트 바를 사용하여 동물의 머리를 입체 프레임에 고정합니다. 이어바로 고막을 뚫지 않도록 주의하십시오.
5. 안과용 젤 또는 세럼 식염수를 각 눈에 한 방울 떨어뜨려 눈을 보호하십시오.

2. 쥐의 측두골에서 AC의 위치

1. 메스를 사용하여 정중선을 따라 절개하여 두개골을 드러내고 두개골 표면을 덮고 있는 골막을 후퇴시킵니다.
2. 멸균 면 팁을 사용하여 두개골 표면을 덮고 있는 혈액을 부드럽게 제거하여 쥐 뇌의 Paxinos 및 Watson 아틀라스에 따라 브레그마, 람다 및 귀 간 0을 시각화합니다.
3. 메스로 두개골의 등쪽 삽입 부위 근처의 측두근을 절개합니다. 바늘과 봉합사 재료를 사용하여 근육을 당겨 빼내고 봉합사 재료를 정위 프레임에 고정합니다. 이렇게 하면 시간적 뼈가 노출됩니다. 출혈이 발생하면 차갑고 멸균된 식염수로 헹굽니다.
4. 멸균 직선 바늘을 정위 마이크로 매니퓰레이터에 놓고 완전히 고정되었는지 확인합니다.
5. 바늘 끝이 귀 간 0으로 설정되도록 바늘이 두개골 표면 바로 위에 올 때까지 바늘을 천천히 내립니다. 이 점을 0으로 설정하고 이 점에서 좌표를 결정합니다.
6. 관심 있는 뇌 영역에 따라 정위 좌표를 변경합니다. 쥐 뇌의 Paxinos 및 Watson 아틀라스를 활용하여 이러한 좌표를 결정합니다. 좌표가 결정되면 해당 좌표와 일치하도록 바늘을 움직입니다.
7. 다음 네 점의 좌표를 사용하여 AC를 대상으로 합니다: A: 전후(A/P) = -5.8mm, 내측(M/L) = +/- 6.4mm; B: A/P= -2.7mm, M/L= +/- 6.4mm; C: A/P= -2.7mm, M/L= +/- 8.67mm; D: A/P= -5.8mm, M/L= +/- 8.67mm. 바늘을 측두골 바로 위로 내려 이 네 점을 각각 시각화합니다. 마커 펜을 사용하여 측두골에 점을 표시하고 연결하여 직사각형을 그립니다. 사각형은 뼈에서 창을 여는 안내 역할을 합니다(그림 1).

3. AC

1. 전기 드릴과 작은 드릴 비트(0.6mm Ø)를 사용하여 창을 엽니다. 뼈가 떨어질 때까지 8,000rpm으로 사각형 둘레를 뚫습니다. 피질하 구조의 손상을 방지하기 위해 차가운 멸균 식염수로 헹궈 드릴링 표면을 냉각시킵니다. 뼈가 무너지면 저항이 떨어지는 것을 감지할 수 있습니다. 뇌를 뚫지 않도록 주의하세요.
2. 테두리가 느슨해지면 가는 집게로 덮고 있는 뼈를 잡아당겨 차갑고 멸균된 식염수에 보관하십시오.

4. AC

1. 수술용 현미경(10X)을 사용하여 미세 수술용 칼로 수막을 부드럽게 자르고 두 개의 뾰족한 집게를 사용하여 제거합니다. 출혈이 발생하면 차갑고 멸균된 식염수로 헹굽니다.
2. 멸균 0.24G의 무딘 팁 바늘에 연결된 수술용 흡입 장치(압력 -20bar)를 사용하여 AC를 부드럽게 흡입합니다. 이 점은 매우 중요하며 매우 신중하게 수행되어야 합니다: 6개의 피질층만 흡인하고 밑에 있는 백질은 흡인하지 마십시오.
3. 천공하는 동맥의 출혈이 멈출 때까지 흡인합니다.
4. 흡인이 끝나면 추출된 뼈로 부상 부위를 덮고 흡수성 지혈 거즈를 바릅니다. 위치
5. 측두근이 원래 위치를 회복하도록 한 다음 상처 클립(9mm)을 사용하여 피부를 봉합합니다. 항생제 연고를 바르십시오. 3일 동안 하루에 두 번씩 상처 부위에 연고를 계속 바른다.
   참고: 각 도포는 상처에 적용되는 얇은 층으로 구성됩니다.
6. 수술 후 1시간 동안 진통제로 쥐의 등(0.05mg/kg)에 부프레노르핀을 피하주사하고, 72시간 동안 8시간마다 주사합니다.
7. 동물이 깨어날 때까지 가열 패드에 동물을 보관하고 회복을 위해 케이지로 되돌려 놓습니다.

그림 1: 세 가지 다른 수술 단계에서 쥐 측두골의 이미지. (A) AC의 입체 좌표를 측두골로 전송합니다. 4 점의 좌표는 다음과 같습니다 : A : A / P = -5.8 mm, M / L = +/- 6.4 mm; B: A/P= -2.7mm, M/L= +/- 6.4mm; C: A/P= -2.7mm, M/L= +/- 8.67mm; D: A/P= -5.8mm, M/L= +/- 8.67mm. (B) 좌표는 창을 여는 데 안내할 시간 뼈의 표면에 사각형을 그리기 위한 참조로 사용됩니다. (C) 드릴링 후 뼈에 열린 창을 표시합니다. 혈관이 있는 수막은 뇌 표면에서 관찰할 수 있습니다. R : rostral, D : 등쪽.