Thread Bolt를 이용한 Middle Cerebral Artery Occlusion을 통한 허혈성 뇌졸중 유도

초록

출처: Liu, P., et al., 쥐의 급성 뇌졸중 후 뇌 회복을 평가하기 위한 전임상 모델. J. Vis. 특급 (2019)

이 비디오는 스레드 볼트를 사용하여 중대뇌동맥(MCA)을 폐색하여 쥐 모델에서 허혈성 뇌졸중을 유도하는 과정을 보여줍니다. 이 시술에는 경동맥을 결찰하고, 외부 경동맥에 실 볼트를 삽입하고, MCA에서 뇌로 가는 혈류를 차단하여 신경 세포를 사멸시키고 허혈성 뇌졸중을 모방하는 것이 포함됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 쥐의 편측성 중대뇌동맥 폐색/재관류(MCAO/R) 모델 구축

참고: 수술 중에는 혈관 파손을 방지하기 위해 마이크로핀치를 부드럽게 사용하십시오. 혈관이 분리되어 있을 때 쥐의 목에 있는 신경 및 기타 혈관의 손상을 피하십시오. 모든 생존 수술 절차에 대해 적절한 무균 기술을 제시하기 위해 주의를 기울여야 합니다. 비디오의 뒷부분에 설명된 기술은 전체 절차를 통해 연습해야 합니다.

1. 수술 내내 작은 동물 온도 조절기에서 쥐의 체온을 37.0 ± 0.5 °C로 유지하십시오. 6cm 5-0 봉합사 4개를 준비합니다.
2. 소동물 마취기(폐가스 처리기 포함)의 산소 유량을 0.4−0.6L/min으로 설정하고 이소플루란의 농도를 5%로 설정합니다. 쥐를 마취 기계에 넣으십시오.
3. 동물이 기절한 후 쥐를 수술용 고정 테이블에 올려 놓습니다. 쥐의 입을 마취 기계의 마스크에 연결하십시오 (산소 유속은 변하지 않고 이소 플루 란 농도를 3 %로 조정). 동물이 사지 긴장, 각막 반사 신경 및 통증의 부족을 관찰하여 깊은 마취에 들어갔는지 확인합니다.
4. 팔다리를 종이 붕대(또는 다른 도구)로 수술대에 놓도록 고정하십시오.
5. 전기 면도기로 넥 코트를 제거하고 75% 알코올로 살균합니다(요오드포가 더 좋습니다). 갈고리로 쥐의 입을 고정하십시오.
6. 안과 가위로 목의 중앙 세로 모양을 따라 2-3cm 자릅니다.
7. 총경동맥을 분리한다. 안과 겸자로 피하 근육을 분리합니다. 집에서 만든 견인기를 사용하여 시야를 완전히 노출시킵니다. 안과 겸자로 기관의 전방 근육을 분리한 후 총경동맥이 보일 때까지 오른쪽 흉쇄유돌 힘줄을 따라 분리합니다.
8. 총경동맥, 외경동맥, 내경동맥을 안과 겸자로 분리한다. 총경동맥(경동맥(경동맥), 심장 끝에서 멀리 떨어진 외부 경동맥(경동맥(경질 매듭), 내부 경동맥(느슨한 매듭)을 5-0 봉합사로 결찰합니다. 심장 끝 근처의 외부 경동맥에 5-0 봉합사를 긋습니다.
9. 나사산 볼트를 삽입합니다. 안과 가위를 사용하여 외부 경동맥의 작은 구멍을 자르고 나사산 볼트를 부드럽게 삽입합니다. 느슨한 매듭을 짓고 있던 외부 경동맥의 봉합사를 결찰하고 외부 경동맥을 차단합니다.
   1. 내부 경동맥의 느슨한 매듭을 풀고 중간 대뇌 동맥(봉합사 표시)의 시작 부분에 나사산 볼트를 계속 삽입합니다. 그런 다음 노출된 나사산 볼트를 잘라냅니다.
10. 허혈 시간(2-3시간)에 도달한 후 하나의 마이크로핀셉으로 외부 경동맥의 골절을 고정하고 다른 마이크로핀셉으로 나사산 볼트를 부드럽게 당겨 빼냅니다. 나사산 볼트의 앞쪽 끝이 내부 경동맥에서 완전히 빠지면 5-0 봉합사가 늘어선 외부 경동맥을 접합한 다음 나사산 볼트를 완전히 당겨 빼냅니다.
11. 총경동맥을 풀고 상처 표면에 ~50,000U의 페니실린 나트륨 분말을 두드려 감염을 예방합니다. 피하 근육과 피부를 4개의 봉합사로 봉합합니다.
12. 쥐를 케이지에 다시 넣은 후 수술 후 물 부족을 방지하기 위해 1mL 주사기(SQ-PEN 주입이 더 좋음)를 사용하여 쥐에게 ~0.2mL의 멸균 식염수를 경구로 제공합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
해부학 현미경	라이카 (독일)	S8	현미경 작동 기기
전기면도기	상하이 Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.	3000#	쥐의 목에서 털 제거
이미지 프로 플러스 소프트웨어	미디어 사이버네틱스 주식회사	6	경색 부피 분석
이소플루란	RWD 생명과학	217170702	마취 가스
마이크로핀셋	상하이 Jinzhong 의료 기기 유한회사	10cm	혈관 미세조작
마이크로시어	상하이 Jinzhong 의료 기기 유한회사	10cm	혈관 미세조작
안과용 겸자	상하이 Jinzhong 의료 기기 유한회사	10cm	보조 피부 및 근육 해부학
안과용 가위	상하이 Jinzhong 의료 기기 유한회사	10cm	목의 피부를 자르는 데 사용
소동물 마취기	상하이 Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.	ABM3000	가스 마취 기계
작은 동물 온도 조절기	베이징 다미다 테크놀로지 주식회사	DM.7-YLS-20A	작동 중 동물의 체온을 일정하게 유지하기 위해
수술용 가위	상하이 의료기기유한회사	16cm	참수 및 뇌 제거에 사용
봉합사	상하이 진환 의료기기유한회사	4-0 / 5-0	피부 및 근육 봉합사에 사용 / 혈관 결찰에 사용
나사산 볼트	베이징 Cinontech Co. Ltd.	2636/2838/3040/3043-A4	쥐의 중대뇌동맥 막힘