마우스 모델에서 저산소증 및 허혈을 통한 혈전성 뇌졸중 유도

초록

출처: Sun, Y. Y., et al., 일시성 뇌저산소증-허혈에 기반한 혈전성 뇌졸중 모델. J. Vis. 특급 (2015).'

이 비디오는 마우스 모델에서 오른쪽 총경동맥을 차단하고 마우스를 저산소 환경에 노출시켜 혈전성 뇌졸중을 복제하는 절차를 보여줍니다. 이 과정은 뇌로 가는 혈액과 산소의 흐름을 감소시켜 혈전 형성과 뇌 손상을 유발합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 설정

1. 수술 전 최소 15분 동안 37°C의 히트펌프에 연결된 보온 패드에 수술 침대를 준비합니다. 수술 침대에 3ml 주사기 배럴을 사용하여 넥 롤을 놓습니다. 의료용 공기에서 2% 이소플루란으로 마취 가스를 준비합니다.
2. 오토클레이브 집게, 가위, 마이크로 바늘 홀더, 지혈제, 면봉 및 봉합사를 준비합니다. 또한 티슈 접착제와 눈 연고를 준비합니다.
3. 저산소증 시스템과 온도 조절기를 난방 l로 설정하십시오.amp 및 직장 프로브. 7.5% O₂에 2% 이소플루란을 92.5% N₂와 함께 사용하여 저산소증 가스를 준비합니다.
4. 수술 1시간 전에 서방형 멜록시캠(4.0mg/kg)의 피하 주사로 생쥐를 분석합니다.

2. 일과성 뇌성 저산소증-허혈(그림 1B)

1. 10-13주 된 수컷 C57BL/6마리의 22-30g 생쥐를 마취 유도실에서 3% 이소플루란으로 동물이 발을 쥐어짜도 반응하지 않을 때까지 마취한 다음 전자 면도기를 사용하여 오른쪽 목의 털을 제거합니다.
2. 의료용 공기 중 2% 이소플루란으로 연결된 수술 침대에 2L/min의 유속으로 마우스를 놓습니다. 의료용 테이프를 사용하여 목을 따라 뻗은 앞다리를 옆구리로 굴립니다.
3. 절개 부위를 베타딘으로 세척한 다음 알코올과 면봉으로 세척합니다.
4. 해부 현미경으로 정중선 피부에서 약 0.2cm 측면에서 직선 집게와 마이크로 가위를 사용하여 0.5cm 오른쪽 경추 절개를 만듭니다.
5. 가늘게 톱니 모양의 집게를 사용하여 근막과 조직을 분리하여 오른쪽 총경동맥(RCCA)을 노출시킵니다. 한 쌍의 가늘고 부드러운 집게를 사용하여 RCCA를 미주신경에서 조심스럽게 분리합니다.
6. RCCA에 두 개의 미리 절단된 5-0 실크 봉합사(릴리스 가능)를 매듭지은 다음 4-0 나일론 모노필라멘트 봉합사 (그림 1C)를 사용하여 피부를 꿰매십시오.
7. 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 안연고를 바릅니다.
8. 마우스를 저산소증 시스템으로 빠르게 옮기고 30분 동안 0.5-1L/min의 유속으로 7.5% O₂에 2% 이소플루란이 함유된 안면 마스크에 코와 입을 넣습니다.
   1. 저산소증이 있는 동안에는 히팅 램프와 함께 온도 조절기를 사용하여 직장 온도를 37.5 ± 0.5 °C에서 조절합니다. 호흡수를 80-120 breaths/min으로 모니터링합니다. 저산소증 동안 체온을 37°C 이상으로 유지하는 것은 지속적인 뇌경색을 유발하는 데 중요합니다. 낮은 호흡수는 일반적으로 저산소증 20분 후에 발생합니다. 안면 마스크를 제거하고 호흡수가 40 미만으로 떨어지면 정상적인 공기 공급을 허용하십시오. 이 작업은 1-2분이 소요되며 30분의 저산소증 기간
   에 포함되지 않습니다.

결과

그림 1: 성체 마우스에서 일과성 뇌저산소증-허혈(tHI) 모욕 절차. (A) 혈전증을 촉진하는 Virchow의 삼위일체에는 혈류 정체, 내피 손상 및 혈액의 과응고성이 포함됩니다. (B) tHI 스트로크 절차의 개략도. 풀어줄 수 있는 두 개의 매듭을 우측 총경동맥(CCA)에 묶은 후 30분 동안 노즈콘을 통해 7.5% 산소를 전달하고 마우스의 직장 온도를 37-38°C로 유지했습니다. 일시적인 전신 저산소증 후, 풀릴 수 있는 봉합사 매듭의 한쪽 끝을 잡아당겨 CCA 결찰을 풀어냈습니다. MCA, 중대뇌동맥; ICA, 내부 경동맥; ECA, 외부 경동맥; CCA, 총경동맥. (C) 일과성 우측 CCA 폐색에 대한 수술 절차. 1. 두 개의 미리 절단된 봉합사(#1 및 #2)를 격리된 오른쪽 CAA 아래에 배치...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
성인 수컷 마우스	찰스 리버	C57BL/6	생후 10~13주(22~30g)
모바일 실험실 동물 마취 시스템	베트핍	901807	마취
의료용 공기(압축) 공기 탱크	에어가스	유엔1002	마취
이소플루란	피라말 헬스케어	확인서 66794-013-25	마취
Multi-Station Lab 동물 마취 시스템	서지벳	V703501	저산소증 시스템
7.5% O2 균형 92.5% N2 탱크	에어가스	유엔 1956	저산소증 시스템
난방 램프가 있는 온도 조절기	콜 파머	EW-89000-10	온도 조절기
직장 프로브	콜 파머	NCI-00141PG	온도 조절기
해부 현미경	올림푸스	SZ40	외과적 설정
온난화 패드가 있는 히트 펌프	게이마르	TP700	외과적 설정
미세한 곡선 집게 (톱니 모양)	증권 시세	11370-31	수술 기구
가는 곡선 집게 (부드러운)	증권 시세	11373-12	수술 기구
마이크로 가위	증권 시세	15000-03	수술 기구
마이크로 바늘 홀더	증권 시세	12060-01	수술 기구
Halsted-Mosquito 지혈	증권 시세	13008-12	수술 기구
5-0 실크 봉합사	하버드 기구	624143	수술 용품
4-0 나일론 모노필라멘트 봉합사	일견	766B	수술 용품
조직 접착제	애보트 연구소(Abbott Laboratories	NC9855218	수술 용품
Puralube 수의사 연고	어부	NC0138063	안건조증 예방